己酸菌复壮培养技术试验与研究

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1、己酸菌复壮培养技术试验与研究来源：录入时间：06-05-1411:22:34摘要针对己酸菌实际生产，探讨采用更换培养基的方式进行菌种复壮，并在培养过程中进行种子热处理试验、己酸菌的生长曲线测定、接种量对己酸菌生长的影响试验、己酸菌种子染菌后的处理试验等等。通过大量试验分析，得出较优的培养和检测方案，并将优良种子直接用于大生产。实践证明，具有很强的实用性和较大的技术参考价值。关键词：己酸菌　复壮　培养己酸菌培养是各大白酒企业近年来重要的科研项目，是窖池养护和人工窖泥培养的基础，也是提高白酒质量的重要环节。但在其生

2、产及应用过程中，工艺还不是非常成熟，存在很多需要探讨研究的问题，需要寻找更佳的培养方案，以提高质量，降低成本。在实际生产过程中，我们对己酸菌培养前期的各个环节进行了认真、多次的反复的研究，总结出了一套经济有效的己酸菌菌种复壮方法，通过种子热处理试验、接种量对己酸菌生长影响试验、进行己酸菌生长曲线测定，得出了最佳方案，并探讨出较好的检测记录方法。1　培养方案1.1　培养基的制备1.1.1　蛋白胨培养基1.1.1.1　蛋白胨1.5%，乙酸钠0.5%，葡萄糖0.5%，牛肉膏0.2%，磷酸氢二钾0.05%，硫酸铵0.0

3、3%，硫酸镁0.01%，调节PH7.0~7.2，于0.12MPa高压灭菌30分钟。1.1.1.2　称1%碳酸钙单独灭菌，接种前连同2%乙醇一并加入。1.1.2　乙酸钠培养基1.1.2.1　乙酸钠1%，酵母膏0.1%，硫酸铵0.05%，磷酸氢二钾0.04%，硫酸镁0.02%，调节PH6.9~7.2，于0.12MPa高压灭菌30分钟。1.1.2.2　称1%碳酸钙单独灭菌，接种前一并加入2%乙醇。1.2　己酸菌种子培养方式1.2.1　复壮培养：取己酸菌种子100ml倒入150ml灭菌小三角瓶中，包扎后于90℃水浴中处

4、理10分钟，然后立即倒入培养基中，摇匀后置于35℃恒温箱中培养7~10天。1.2.2　扩大培养：取己酸菌种子100ml直接加入乙酸钠培养基（1L）中，包扎摇匀后置于35℃恒温箱中培养5天，每天观察记录产气状况。1.3　采用蛋白胨培养基及乙酸钠培养基进行复壮种子对比试验结果1.3.1　采用蛋白胨培养基进行己酸菌种子的复壮培养，共进行3批，第六天测得结果为2.85、2.515、2.65亿/ml。1.3.2　采用蛋白胨培养基更换乙酸钠培养基的方式进行己酸菌种子复壮培养，菌数极多，只是菌体较为瘦弱。可以看出，采用蛋白胨

5、培养基在技术上具有可行性，但用于大生产每吨成本达1339.6元，而乙酸钠培养基仅为160.5元，高7.3倍，用蛋白胨培养基不具有经济上的可行性。因此，考虑将蛋白胨培养基种子转接到乙酸钠培养基上，进行扩大培养。1.3.3　采用乙酸钠培养基培养己酸菌液，使用蛋白胨培养基种子予以转接，刚开始效果不甚理想，经多批次转接试验，最高达1.6亿/ml，正常培养较高时达1.3~1.4亿个/ml，完全满足生产需要，采用更换培养基的方式进行生产育种，操作简便，效果良好，具有实用性，生产中可半年至一年实施一次。2　己酸菌种子处理及取

6、样检测方法探讨2.1　己酸菌种子热处理［1］2.1.1　热处理的目的：一是杀死杂菌及己酸菌繁殖体，纯化菌种；二是激活己酸菌种，促进其迅速繁殖。2.1.2　己酸菌热处理的方式：传统采用80℃热处理10分钟，但在实施中存在一个问题，实际温度是以水浴温度计为准，则实际达不到种子液80℃的温度要求，而以处理种子液测温操作较为不便，经反复试验，我们略作改进，采用90℃水浴处理，效果较为理想。2.2　己酸菌细胞数的检测方法［2］2.2.1　采用血球计数板方法2.2.1.1　取己酸菌液1ml加入9ml蒸馏水中，用吸管吸放数次

7、。2.2.1.2　用吸管加1滴稀释的己酸菌液加于计数板上，然后用干净盖玻片轻轻自一边向另一边压下，再用两只手的手指紧压盖玻片两边，使盖玻片与计数板完全密合。2.2.1.3　数分钟后，待菌体细胞沉降到计数板表面，在40倍物镜下计数。2.2.1.4　计数时，在25×16计数板上，取左上、右上、左下、右下及中间五个大格共80个小格的细胞数。计数时，凡大格线上的细胞只计上方及右方线上的细胞。2.2.1.5　计数完毕，将计数板在水龙头上冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干。2.2.1.6　计算：1ml己酸菌细胞数＝（80

8、小格细胞数÷80）×400×10000×10＝80小格己酸菌细胞数×5000002.2.2　关于血球计数板检测方法的优缺点2.2.2.1　使用计数板检测的缺点：由于己酸菌菌体小，仅为5~9×1.0nm左右，因此不能完全沉降到计数板表面，造成计数不完全，形成误差，使绝对误差的存在不可避免。2.2.2.2　使用计数板检测的优点：检测及时，能够很快反馈给生产班组指导生产；测量相对误差小，对于