鸭坦布苏病毒e蛋白基因的原核表达

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1、鸭坦布苏病毒E蛋白基因的原核表达收稿日期：2012-02-23基金项目：公益性行业(农业)专项经费(201003012)；国家国际科技合作项目（2010DFB33920）；中国农业科学院上海兽医研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目（2010JB04）作者简介：姬希文，女，硕士研究生，预防兽医学专业通信作者：李泽君，E-mail：lizejun@shvri.ac.cn姬希文1,2，李雪松1，边延峰3，李国新1，颜丕熙1，张七斤2，李泽君1(1.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241；2.内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特010018；3.天津生机集团股份有限公司，天

2、津300384）摘要：本研究利用RT-PCR方法扩增鸭坦布苏病毒（DuckTembusuvirus，DTMUV）奉贤株（FX2010）的结构蛋白E基因，并将其克隆至原核表达载体pET32a（+），构建重组表达质粒pET32a-E。将其转化受体菌E.coliBL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导进行表达。SDS-PAGE和Westernblot试验检测结果表明，E基因在大肠杆菌中得到了表达，并且可与抗DTMUV的多克隆抗体发生特异性反应。E基因的成功表达为DTMUV的诊断试剂盒、疫苗等的研制奠定基础。关键词：鸭坦布苏病毒；E基因；克隆；表达中图分类号：文献标志码：A文章编号：167

3、4-6422（2012）02-0000-00EXPRESSIONOFEPROTEINOFDUCKTEMBUSUVIRUSINPROKARYOTICCELLSJIXi-wen1,2，LIXue-song1，BIANYan-feng3，LIGuo-xin1，YANPi-xi1，ZHANGQi-jin2，LIZe-jun1（1.ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,CAAS,Shanghai200241,China;2.CollegeofVeterinaryMedicine,InnerMongoliaAgriculturalUniversity,Hohhot

4、010018,China;3.TianjinShengjiGroupCo.,Ltd.,Tianjin300384,China）Abstract:TheEgeneofduckTembusuvirus(DTMUV)wasamplifiedbyRT-PCRandinsertedintothemultipleclonesitesofthepET32a(+)vector.TherecombinantplasmidwastransformedintoBL21(DE3)competentcellsandthecellswereinducedwithIPTGtoexpresstheEprotein.S

5、DS-PAGEandWesternBlotassaysshowedthatheEproteinwassuccessfullyexpressedandkepttheactivityforbindingtheDTMUV-specificantibody.BasedonEproteinexpressedinprokaryoticcells,itmightbecomeeasytodevelopdiagnosiskitsandvaccinesforDTMUV.Keywords:Ducktembusuvirus;Egene;cloning;expression自2010年春季以来，中国华东地区发生

6、了以产蛋下降和死亡为主要特征的鸭病的流行，之后该病迅速传播全国多个省市，到目前为止，全国大部分主要水禽养殖地区仍然受到该病的威胁，发病率高达100%，病死率在5%~10%之间。经过病毒分离鉴定，目前已经确定引起该病的病原为鸭坦布苏病毒（Ducktembusuvirus,DTMUV）[1]。DTMUV属黄病毒科黄病毒属[2]，呈球型，直径30～50nm，核心含单股RNA，有衣壳。从序列上分析，该病毒可能与其他黄病毒属的病毒一样，具有3结构蛋白，即E蛋白、核蛋白和白蛋白为糖蛋白。其中，E蛋白是诱发动物机体产生抗日本乙脑病毒中和抗体的重要抗原[3]，黄病毒属中多数病毒的E蛋白与机体宿主的免疫

7、应答作用密切相关，能刺激机体产生中和抗体和血凝抑制抗体[4,5]，诱导机体产生持久T记忆细胞，引起保护性免疫反应。E蛋白在病毒致病过程中也起关键性作用，该蛋白上一些关键的氨基酸的替代即可引起神经毒力和侵袭力的丧失[3]。此外，E基因还与病毒吸附、侵入宿主细胞有关。本研究首次表达和纯化了具有生物学活性的DTMUVE蛋白，为DTMUV早期诊断试剂盒、疫苗与E蛋白结构功能研究奠定了基础。1材料和方法1.1质粒、菌种及试剂pET32a（+）表达载体和J