动物细胞培养和核移植技术

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1、专题2细胞工程2.2动物细胞工程2.2.1动物细胞培养和核移植技术教材预览导言动物细胞工程常用的技术手段有＿＿＿＿、＿＿＿＿＿、＿＿＿＿、＿＿＿＿＿、＿＿＿等，其中＿＿＿＿＿＿＿是其他动物细胞工程常用的技术的基础。一.动物细胞培养1.动物细胞培养的过程培养动物所用的细胞大都取自__________或出生不久的__________器官或组织。将组织取出来后，先用__________等使组织分散成单个细胞，然后配置成一定浓度的细胞悬浮液放在培养瓶中的具有一定浓度的细胞悬浮液在培养箱中培养的过程叫做________

2、__;随着细胞生长的和增殖，培养瓶中的细胞越来越多，需要定期地用_________使细胞从瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中培养，这称为____________。传代细胞中遗传物质没有发生改变的叫做__________;遗传物质发生了改变，并且带有________的特点，这种传代细胞叫做_________，这种细胞可以________地传代下去。动物细胞的融合除物理和化学方法诱导融合之外，还常常用到________作为诱导剂。动物细胞融合技术最重要的用途，是制备_________

3、_____思考：胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？提示：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。思考.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？提示：用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活

4、性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。2.动物细胞培养的条件一般动物细胞体外培养需要1___________2_________________3______________4.______________等条件思考：为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？提示：血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素

5、等及多种生长因子（如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等）；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清。3.动物细胞培养技术的应用培养动物细胞可以用于检测有毒物质。根据__________占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物种的毒性。现在__________已成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段。二.动物细胞核移植技术和克隆动物动物核移植是将动物的一个细胞的____

6、_____,移入一个已经去掉_________中.使其重组并发育成一个新的_________,这个新的胚胎最终发育为动物个体。教学过程一．动物细胞培养1．动物细胞培养的过程取动物组织块——剪碎组织——分散成单个细胞——原代培养——传代培养原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。初次培养称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代

7、，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性细胞融合的方法去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合诱导方法物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒用途获

8、得杂种植株制备单克隆抗体思考与讨论1.幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？思考一下，这是什么道理？提示：细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖力越强，所以更容易培