脱毒草莓种苗病毒检测技术规程 ny t -

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1、脱毒草莓种苗病毒检测技术规程NYT406-2000B15NY中华人民共和国农业行业标准NY/T406-2000脱毒草莓种苗病毒检测技术规程Rulesforvirusdetectionofvirus-freeseedIingstrawberries2000-09-22发布2000-12-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T406-2000前言为了有效地实施对脱毒草莓种苗质量检验和管理,规范脱毒种苗市场,促进脱毒技术的推广,实现脱毒草莓种苗病毒检测的规范化、标准化,特制定本规程。本规程在参照国内外草莓病毒检测技术最新研究进展的基础上,结合

2、当前国内生产实际,力求达到快速、准确、可操作性强的检测要求。检测对象主要选择生产上发生分布范围广、危害性大的病毒。检测方法主要采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测和指示植物检测。本规程内容包括脱毒草莓种苗病毒检测的适用范围、检测对象、抽样方法、检测方法和质量要求。本标准的附录A是标准的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准主要起草单位g农业部植物脱毒种苗质量监督检验测试中心(济南)、山东省植物保护总站。本标准主要起草人:华崇钊、商明清、孙作文、李明立、徐鲁、杨勤民。中华人民共和国农业行业标准NY/T406-2000脱毒草莓种苗病毒检测技

3、术规程Ru四forvirusdetectionofvirus-freeseedlingstrawberrles1范围本标准规定了脱毒草莓种茵的病毒检测方法和操作规程。本标准适用于脱毒草莓母本株、组培苗及脱毒草莓种茵的病毒检测。2引用标准下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。NY/T401-2000脱毒马铃薯种薯(苗)病毒检测技术规程3定义本标准采用下列定义。3.1脱毒草莓母本株由脱毒组培苗直接繁育并且不带本规程

4、规定的检测对象、用于提供草莓匍甸茎繁殖苗的母株。3.2脱毒草莓种苗由脱毒草莓母本株繁育并符合本规程规定合格标准的种苗。3.3病毒病株允许率脱毒草莓母本株及种苗繁殖田中病毒病株的允许比率。4检测对象草莓轻黄边病毒(Strawberrymildyellowedge-associatedvirus.SMYEV),草莓镶脉病毒(Strawberryveinbandingvirus.SVBV);草莓斑驳病毒(Strawberrymottlevirus.SMoV);草莓皱缩病毒(Strawberrycrinklevirus.SCrV);5抽样5.1脱

5、毒草莓母本株抽样每株均需检测。繁育季节从待检母本株选取幼嫩叶片作为检测样品。每年检测3次以上。5.2组培苗的抽样5.2.1脱毒核心材料:每株均须检测。5.2.2扩繁组培苗:每扩繁一次随机抽取1%~2%检测。5.3出圃种苗抽样53.1采用分层取样或随机取样等方法抽取样品,抽样数量见表1.中华人民共和国农业部2000-09-22批准2000-12-01实施种苗总数量,株';;10000>10000NY/T406-2000表1草莓种苗抽样数量标准表抽样百分率.%6-103-5注2不足抽样最低数量的全部作为混合样品。抽样最低数量,

6、株1005.3.2将第一次抽取的样品混合后进行二次抽样,随机抽取10%的混合样品检测。6检测方法6.1双抗体夹心酶联免疫吸附检测l法用于检测草莓轻黄边病毒、草莓镶脉病毒。检测方法按NY/T401-2000中附录A的方法执行。6.2指示植物检测法用于检测草莓斑驳病毒、草莓皱缩病毒、草莓镶脉病毒和草莓轻黄边病毒,检测草莓病毒的指示植物及症状见表20检测方法见附录Ao表2检测草莓病毒的指示植物及症状病毒种类指刁之植物草莓斑驳病毒EMCUC5草莓皱缩病毒UC5UCIOUC6草莓镶脉病毒UC5UC4草莓轻黄边病毒UC57质量要求只要酶联免疫检测或指

7、示植物检测呈阳性反应的均为带毒株。脱毒草莓母本株g病毒病株允许率是0。脱毒草莓种苗.病毒病株允许率<:;;5.0%。指m植物症状叶片斑驳叶片皱缩呈镶脉症状叶片反转叶片枯死,整株死亡叶片边缘逐渐变成浅黄Al繁育指示植物NY/T406-2000附录A(标准的附录)指示植物检测法采用欧洲草莓(Fragaγiavesca)及兰莓<Fragariavirginiana)中的易感品种(见表幻,在防虫条件下将指示植物和待检样品分别栽植在花盆中,不断去掉指示植物的匍匍茎,使叶柄加粗,当叶柄直径达到2mm左右时嫁接。A2嫁接小叶嫁接法2以待检样

8、晶成熟叶片(只留中间小叶下半部〉为接穗,将指示植物剪去中间小叶作为础木,劈接后置于20-250C、光照充足的条件下。每个待检样品同时用两种指示植物进行鉴定,每个待检样晶各嫁接3株指示植物,每株

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