细胞治疗用无血清培养基ppt

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1、细胞治疗用无血清培养基国内外现状邵宁生CIK和DC细胞CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-InducedKiller，CIK)是一种新型的免疫活性细胞，CIK增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。由于该细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，故又称为NK细胞（自然杀伤细胞）样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性，和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，如同“细胞导弹”，能精确“点射”肿瘤细胞，但不会伤及“无辜”的正常细胞。尤其对手术后或放化疗后患者效果显著，能消除残留微小的转移病灶，

2、防止癌细胞扩散和复发，提高机体免疫力，因此，CIK细胞被认为是新一代的肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。DC(树突状细胞)：一个独特的调控初始免疫反应的白细胞群落。免疫细胞培养的一般操作步骤CIK细胞培养：1、准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC）；或根据标准的外周血单个核细胞解冻程序，在37°C的水浴，快速解冻（<1分钟）冷冻小瓶的外周血单个核细胞2、用生理盐水洗涤细胞，根据需要也可加入2-5％的热灭活的的人自体血浆。3、计数细胞可以使用电子（即Coulter计数器，VI-细胞）或手动的方法（即血球计数仪）。4、离心细胞，清除洗涤缓冲液。5、培养初

3、期，用含细胞因子（如IL-2）的培养基重悬PBMC；CD3+T细胞密度保持在大约0.5-1×106/mL。转移细胞到相应的细胞培养容器（培养袋、培养瓶）。随后可应用各种操作激活T细胞，包括添加刺激的抗体或抗原抗原呈递细胞。无论培养T细胞的规模大小，细胞均可被隔离，激活和扩大。6、在37℃，5％CO2的潮湿培养箱。在潮湿的气氛中，在37°C，5％CO2孵育培养容器。在对数生长期细胞，需要维持细胞所需的浓度。为了保持细胞指数生长期，当细胞密度超过1×106/mL时，需要分离传代，维持细胞密度在0.5-1×106/mL（例如，2×106个细胞/mL以上，

4、按1:4比例0.5x106细胞/mL）。在静态平板培养中为了获得最佳的气体交换，建议培养基深度不超过1到1.2厘米。免疫细胞培养的一般操作步骤单核细胞树突状细胞(DC)培养：1、准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC）。2、将外周血单个核细胞在铺在培养瓶中，用加入25mL免疫细胞无血清培养基。3、在37℃，5％CO2的潮湿培养箱中孵育2〜3小时。4、弃掉含非贴壁细胞的培养基。5、用生理盐水洗涤贴壁细胞（主要是CD14+单核细胞）三次。6、往免疫细胞无血清培养基添加50至100ng/mL的重组人IL-4和50ng/mL的重组人GM-CSF。细胞密度应介

5、于1~3x105细胞/mL之间。研究者可视情况加入灭活的人自体血浆。7、在37℃，5％CO2的潮湿培养箱中连续孵育5天。培养3天左右换液。同时添加IL-4和GM-CSF。8、6天之后，细胞表现出典型的树突状细胞的形态和表面标记（细胞CD1a，CD80，CD86，HLA-DR）。9、向培养基中添加1μg/mL的LPS或者50μl/mL的TNF-α诱导的树突状细胞的成熟。CIK、DC-CIK细胞无血清培养基标准：可用于免疫细胞临床治疗研究的无血清培养基，生产过程符合cGMP的标准规范。可用于人类体外组织及细胞培养。有效避免人畜共染疾病问题，同时无血清细

6、胞培养基批间差异小，培养条件容易保持一致，实验的重复性大为提高。使细胞大量增殖、不分化。常用国外公司产品LONZA的X-VIVOTAKARA的GT-T551都是非常好的无血清培养基，适合CIK、DC-CIK的培养都可用于临床。LonzaX-VIVO™培养基说明书Lonza’s的努力和许多临床实验的合作已经证明lonza有条件和技术推进免疫、癌症、基因和其他细胞治疗的发展，lonza的宗旨就是用无血清组分在细胞治疗中为细胞提供一个营养全面和平衡的环境，这里面不含任何外源性生长因子，细胞增殖人工刺激物或者不确定成分。　　这个产品避免了任何蛋白激酶c刺

7、激物，适用于人类和鼠淋巴细胞第二信使激活的研究，成分完全包含药用级的人类白蛋白、重组人类胰岛素和经巴氏消毒的人转铁蛋白。所有X-VIVO培养基都是在目前GMP条件下生产，并且通过FDA认证，查询认证可联系产品经理。image.baidu.com-查image.baidu.com-查宝日医生物技术(北京)有限公司TakaraBiomedicalTechnology(Beijing)Co.,Ltd.GT-T551产品特点:日本原装进口无血清培养基，适用于人体淋巴细胞及DC细胞培养。日本原装进口无血清培养基，已经加入人血白蛋白组分支持淋巴细胞的高密度细

8、胞培养在日本多家医院用于临床治疗的细胞培养配制用水符合国家药监局《人体细胞治疗研究和制剂质量控制指导原则》中注射用水标准