环境微生物实验指导书

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1、试验一培养基的配制及灭菌【目的要求】1．了解培养基的概念、种类及用途2．了解培养基的配制原理及其常规配制程序3．学习和掌握细菌、放线菌、霉菌、酵母菌常用培养基的配制方法。【基本原理】培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基种类很多。不同培养基一般都应含有微生物生长繁殖所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。此外，为了满足微生物生长繁殖的要求，还必须控制培养

2、基的pH值。牛肉膏蛋白胨培养基是一种用于培养细菌的培养基，属于半合成培养基。高氏一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基。马丁氏培养基和豆芽汁葡萄糖培养基分别用于霉菌和酵母菌的分离培养。【材料与用品】1．材料与试剂牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、可溶性淀粉、琼脂、黄豆芽、NaCl、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、KH2PO4、MgSO4•7H2O、NaOH溶液（1mol/L）。【仪器与用品】天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、pH试纸、棉花、纱布、牛皮纸、线绳、报纸等。一、肉膏蛋白胨培养基的配制1．培养基成分

3、牛肉膏0.3g蛋白陈1gNaCl0.5g琼脂1.5g水100mlpH7.2~7.42．配制方法（1）称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于唐瓷缸中，加入所需水量的2／3左右的蒸馏水；用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量。然后加入少量蒸馏水于小烧杯中，加热融化，倒入上述唐瓷缸中。将唐瓷缸加热，用玻璃棒搅拌，使药品全部溶化。（2）加琼脂：加入所需量的琼脂，加热融化。（3）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。（4）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/lNaOH溶液调pH至7.2~7.4。（5）分装、加塞、包扎。（6）高压蒸

4、汽灭菌20分钟。待培养基冷却至50℃左右时，倒入已灭菌的培养皿中，等到培养基完全凝固后，放入冰箱中保存。二、高氏一号培养基的配制1．培养基成分可溶性淀粉20gKNO31gNaCl0.5gK2HPO40.5gMgSO40.5gFeSO40.01g琼脂20g水1000mlpH7.2～7.42．配制方法（1）称量及溶化：量取所需水量的2/3左右加入到搪瓷缸中，加热至沸腾。称量可溶性淀粉，置于另一小烧杯中，加入少量冷水，将淀粉调成糊状，然后到如上述沸水的搪瓷缸中，继续加热，使淀粉完全融化。分别称量KNO3、NaCl、K2HPO4、MgSO4，依次逐一加入

5、水中溶解。（2）加琼脂：加入所需量的琼脂，加热融化。（3）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。（4）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/lNaOH溶液调pH至7.2~7.4。（5）分装、加塞、包扎。（6）高压蒸汽灭菌20分钟。待培养基冷却至50℃左右时，倒入已灭菌的培养皿中，等到培养基完全凝固后，放入冰箱中保存。三、马丁氏培养基的配制1．培养基成分葡萄糖10g蛋白胨5gK2HPO41gMgSO4•7H2O0.5g琼脂16g水1000ml链霉素溶液（10000U/ml）3.3ml（临用前加入）的2．配制方法（1）称量：称取培养基各成分的所

6、需量。（2）溶化：在搪瓷缸中加入约2/3所需水量，然后依次逐一加入并溶化培养基各成分，再按1000ml培养基加入3.3ml的0.1％孟加拉红溶液。（3）加琼脂：加入所需量的琼脂，加热融化。（4）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。（5）分装、加塞、包扎。（6）高压蒸汽灭菌20分钟。（7）临用前，加热融化培养基，待冷却至60℃左右，按每1000ml培养基以无菌操作加入3.3ml的链霉素溶液，迅速混匀。四、豆芽汁葡萄糖培养基的配制1．培养基成分黄豆芽10g葡萄糖5g水100ml2．配制方法（1）称取新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100m

7、l水，小火煮沸30min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。（2）按100ml10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2g琼脂，继续加热溶化，补足失水。（3）分装、加塞、包扎。（4）高压蒸汽灭菌20分钟。待培养基冷却至50℃左右时，倒入已灭菌的培养皿中，等到培养基完全凝固后，放入冰箱中保存。【思考题】1．制作平板培养基的注意事项是什么？2．培养基配好后，为什么必须马上进行高压蒸汽灭菌？如不能及时灭菌时，应将培养基暂时放置何处？3．如何检查灭菌后的培养基是否无菌？4．在马丁氏培养基的配制中，链霉素为什么要临用前才加入？5．如果你需要配制一种含

8、有某抗生素的牛肉膏蛋白胨培养基，其抗生素的终浓度(或工作浓度)为50μg/ml，你将如何操作?实验二四大类微生物的分离和培养【目的要求】