pcna,bcl2和bax在翼状胬肉中的表达及其意义

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1、PCNA,Bcl2和Bax在翼状胬肉中的表达及其意义作者:颜美荣,李正贤,刘庚勋,周一鸣,彭昌福,王芳【摘要】目的检测翼状胬肉中PCNA,Bcl2和Bax的表达水平,探讨PCNA,Bcl2和Bax在翼状胬肉发病中的作用。方法采用免疫组化Elivision法检测20例翼状胬肉、10例正常结膜中的PCNA,Bcl2和Bax表达水平。结果20例翼状胬肉中PCNA,Bcl2和Bax的阳性表达率分别为95%(19/20),95%(19/20)和80%(16/20),正常结膜中PCNA,Bcl2和

2、Bax的阳性表达率分别为60%(6/10),20%(2/10)和60%(6/10)。PCNA和Bcl2阳性表达两组间差异有显著意义(P<0.05),而Bax阳性表达两组间差异无显著意义(P>0.05)。结论翼状胬肉的发生发展可能与PCNA的高表达和Bcl2与Bax表达失衡有关,可能是细胞异常增殖和凋亡失衡的共同结果。【关键词】PCNA;Bcl2;Bax;翼状胬肉;凋亡;免疫组织化学7翼状胬肉的发生,与紫外线照射及烟尘刺激有关,不仅影响外观,还可能损害视功能,其发病机制目前仍不十分

3、清楚,近年来的研究发现,翼状胬肉是一组织增生性疾病,可能与细胞异常增殖和凋亡有关[1~2],我们应用免疫组织化学Elivision法检测翼状胬肉组织中凋亡相关基因Bcl2,bax和表示细胞增殖指标的PCNA的表达,旨在探讨PCAN,Bcl2和bax基因产物在翼状胬肉发病机制中的作用。为翼状胬肉的化学药物治疗和基因治疗提供新依据。  1材料和方法  1.1一般资料  选择本院2004—2005年门诊及住院的20例翼状胬肉患者的手术标本。其中男11例,女9例,年龄39~64岁,病程15个月~12年

4、;对照组为同期手术的10例正常结膜组织,年龄35~62岁,所有病例均无其他角膜、结膜疾患。标本经10%甲醛固定,常规脱水、石蜡包埋。  1.2方法  标本经固定后,常规脱水石蜡包埋,作3μm连续切片,分别进行HE染色和免疫组织化学染色。切片脱蜡至水化,3%过氧化氢孵育10min,消除内源性过氧化物酶活性,蒸馏水冲洗,PBS浸泡3×2min,微波炉抗原修复(95~98℃),自然冷却至室温,加入即用型Bcl2,bax和1:100PCNA单克隆抗体,37℃孵育30min,或4℃过夜,用普通小鼠IgG及

5、PBS代替一抗作阴性及空白对照,PBS冲洗3×72min,滴加增强剂(A),37℃孵育30min,PBS冲洗3×2min,滴加生物素聚合物(B),37℃孵育30min,PBS冲洗3×2min。二氨基联苯胺显色,苏木素复染,中性树胶封片,显微镜观察照相。  1.3染色结果判断  阳性细胞为呈棕黄色颗粒的阳性反应产物。每张切片在高倍显微镜下(200倍)随机选择5个视野,计算每个视野阳性细胞率,取平均值作为该标本的阳性细胞率。表达结果分为阴性(-):无阳性细胞;弱阳性(+):阳性细胞率<50%;强

6、阳性(++):切片中阳性细胞率>50%。  1.4统计学方法  结果应用χ2检验进行统计学分析。所有数据在SPSS11.0统计软件上进行,以P<0.05为差异有显著性。第2期PCNA,Bcl2和Bax在翼状胬肉中的表达及其意义颜美荣,等  2结果  Bcl2,Bax和PCNA在翼状胬肉及正常结膜中的表达,由表1可见翼状胬肉中Bcl2和PCNA蛋白表达与正常结膜对比差异有显著性,而Bax蛋白表达在两组中则无统计学意义。光镜下观察,翼状胬肉上皮细胞中胞浆、胞膜呈棕黄色染色的细胞为Bc

7、l72,Bax阳性细胞,片状分布于上皮层及上皮下纤维层,但主要见于上皮基底层。正常结膜中仅有2例见到Bcl2阳性表达,而Bax阳性表达较高。Bcl2在翼状胬肉中棕黄色颗粒可见于胞浆、胞膜内,呈均匀分布,但主要见于上皮基底层染色(×400),正常结膜中未见到Bcl2表达染色(×400),Bax在翼状胬肉上皮中可见棕黄色颗粒均匀分布(×400),正常结膜上皮中Bax阳性物质可见于胞浆、胞膜内。PCNA在翼状胬肉及正常结膜中的表达:光镜下观察,为棕黄色阳性颗粒位于细胞核,阳性细胞呈随机分布,静止

8、期、进行期和复发性翼状胬肉的阳性细胞分布不同,静止期和正常结膜阳性细胞仅定位于上皮基底部,且呈散在分布,进行期阳性细胞增多,且向表层发展,复发性翼状胬肉阳性细胞明显增多,定位于上皮全层,染色最深。表1Bcl2,Bax在翼状胬肉及正常结膜的表达情况(略)  3讨论  细胞凋亡与肿瘤的关系是近年来的研究热点之一。细胞凋亡的失控是否导致翼状胬肉的发生发展,备受眼科医生关注,成为目前的研究重点。Bcl2和Bax是该家族中的重要成员,它们主要通过线粒体途径参与凋亡调控,当细胞受到死亡信号

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