兔退变椎间盘模型中髓核细胞凋亡的实验研究

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1、兔退变椎间盘模型中髓核细胞凋亡的实验研究作者：樊守刚，吴小涛，王运涛，李果【摘要】目的：研究细胞凋亡在兔退变椎间盘模型中的作用。方法：用针刺法制作兔退变椎间盘模型，磁共振检查鉴定模型的建立，HE染色计数髓核细胞，TUNEL法染色标记凋亡髓核细胞，并通过激光共聚焦显微镜计数凋亡细胞比例，RTPCR检测Bax和Bcl2凋亡相关基因的表达水平。结果：兔退变模型建立成功，退变组髓核细胞计数低于正常组，凋亡细胞比例高于正常组，退变组抗凋亡基因表达低于正常组，凋亡基因水平高于正常组。结论：凋亡在椎间盘退变模型中存在，并起重要

2、作用。【关键词】椎间盘退变;退变模型;凋亡;激光共聚焦显微镜;兔　　[Abstract]Objective:Tostudytheeffectofnucleuspulposuscellsapoptosisontherabbitintevertebraldiscmodel.Methods:Rabbitmodelsofdegeneratedintevertebraldiscwereestablishedbyanuluspuncturing,whichwerethenidentificatedbyMRI.Nucleuspul

3、posuscellswerecountedusingHEstaining;theproportionofapoptoticcellswascountedbylaserscanningconfocalmicroscopewithTUNELstainingmarkedapoptosisof11nucleuspulposuscells;andRTPCRwereusedindetectionofBaxandBcl2levelsasapoptosisrelatedgenes.Results:Comparedwiththe

4、normalgroup,theamountsofnucleuspulposuscellswerelowerandtheproportionofapoptoticcellswashigherindegenerationgroup.Thelevelofantiapoptosisgeneexpressionwaslowerandthelevelofapoptosisgeneexpressionwashigherindegenerationgroupthanthoseinnormalgroup.Conclusion:The

5、apoptosisinthedegeneratedintervertebraldiscmodelsexistsandplaysanimportantrole.　　[Keywords]intervertebraldiscdegeneration;degenerationmodel;apoptosis;laserconfocalscanningmicroscope;rabbits　　腰椎退变性疾病是临床引起腰腿痛的主要病因，但椎间盘退变的病理机制目前并未完全清楚，年纪的增长、血管难长入、终板的病变导致椎间盘缺少营养、细胞

6、的凋亡、胶原的变化、椎间盘机械负荷及蛋白多糖的变化等都被认为是导致椎间盘退变的病因。研究认为髓核细胞凋亡参与退变过程并在此过程中起关键作用[1]。本实验通过针刺法制作兔退变椎间盘模型，通过模型研究椎间盘退变中凋亡的发生与发展规律。111材料和方法　　1.1材料　　新西兰大白兔(南京农业科学院种兔厂);激光共聚焦显微镜(LeicaTCSSP5，德国)，7.0TmicroMRI(Bruker公司，德国);恒温箱冷冻切片机(MICIROM325，德国);TaKaRaLAPCRTMKitVer.2.1试剂盒(大连宝生物工程

7、有限公司);Trozol(Invitrogen公司，美国);红色荧光标记的TUNEL法凋亡检测试剂盒(InSituCellDeathTMRred，roche，瑞士);Bax和Bcl2引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成：Bax(225bp)上游为5′CCGTGACCATCTTTGTGGC3′，下游为5′TGTCCCGAAGGAGGTTTATT3′;Bcl2(452bp)上游为5′GGGAGAACAGGGTACGATAA3′，下游为5′CCACCGAACTCAAAGAAGG3′;βactin

8、(155bp)上游为5′TATGACTTAGTTGCGTTACACC3′，下游为5′CCTTCACCGTTCCAGTTT3′。　　1.2方法　　1.2.1兔腰椎间盘退变模型的构建纯种成年新西兰大白兔32只，雌雄不限，平均质量2.511kg，采用随机排列数方法分为正常组和退变组各16只，退变组采用侧方倒八字入路对L4-5节段椎间盘行针刺法