人表皮细胞中侧群细胞表型的初步分析

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1、人表皮细胞中侧群细胞表型的初步分析作者：程俊美　任宁　曾庆东　施娟红　李劲松【摘要】目的：检测人表皮细胞中是否存在侧群(sidepopulation，SP)细胞，并研究该表型细胞是否表达通用干细胞标志物ABCG2和表皮干细胞的标志物整合素α6和β1。方法：运用中性蛋白酶和胰蛋白酶两步消化法从手术切除的人包皮组织中分离获得表皮细胞。经Hoechst33342荧光染料和PI染色，流式细胞仪分析并分选SP细胞。采用流式细胞仪分析SP细胞ABCG2、整合素α6和β1的表达情况。结果：人表皮细胞中存在SP细胞，其比例为0.2%～0

2、.3%。用流式细胞仪可检测到在SP细胞以及总表皮细胞中均有少量细胞表达通用干细胞标志物ABCG2以及表皮干细胞的标志物整合素α6和β1，但二者阳性细胞百分比差异无统计学意义(P>0.05)。结论：表皮细胞中的SP细胞是否是富集的表皮干细胞仍存在疑问，还需要进一步的动物体内移植实验、克隆形成能力和增殖能力的研究证实。【关键词】侧群细胞·表皮干细胞·ABCG2·整合素α6·整合素β1　　【ABSTRACT】Objective:Toexploresidepopulation(SP)cellsinhumanepitheli

3、alcellsandtoobservetheexpressionoftheuniversalstemcellmarkerABCG2,epidermalstemcell11markersα6integrinandβ1integrinonSPcells.Methods:EpithelialcellswereobtainedbydigestinghumanskinswithDispaseIIandTrypsinandstainedwithHoechst33342andPI.TheSPcellswereanalyzedandso

4、rtedbythefluorescence-activatedcellsorter.ThentheexpressionofABCG2,α6integrinandβ1integrinwasanalyzedbyflowcytometry.Results:SPcellsaccountedfor0.2%-0.3%oftotalhumanepithelialcells.OnlyasmallpartofcellsexpressedABCG2,integrinα6andintegrinβ1ofbothSPcellsandtotalhu

5、manepithelialcellsdetectedbyflowcytometry.ThedifferenceofpositiveratesbetweenSPcellsandtotalhumanepithelialcellswasnotsignificant.Conclusion:SPcellsaccountedfor0.2%-0.3%oftotalhumanepithelialcells.ThedifferenceofpositiveratesofstemcellsmarkerABCG2,integrinα6andin

6、tegrinβ1betweenSPcellsandtotalhumanepithelialcellswasnotsignificant.　　【KEYWORDS】Sidepopulation·Epidermalstemcells·ABCG2·integrinα6·integrinβ1　　侧群(sidepopulation，SP)细胞是利用Hoechst荧光染料和流式细胞术进行造血干细胞分离时发现的一群特殊细胞，高表达干细胞标志物ABCG2(ATP-bindingcassettesuperfamilyGmember112)[

7、1]。SP细胞既具有类似干细胞的自我更新和多向分化潜能，还具有独特的表型标记和生物学特征，代表了一种新的干细胞类型[2]。已有越来越多的研究者将SP细胞分离法用于对干细胞的分离中。皮肤是始终处于不断更新状态的组织之一，这种不断的更新是由位于表皮基底部和毛囊隆突部的表皮干细胞维持的。表皮干细胞在创伤修复和维持内环境稳定过程中具有重要作用，而且是肿瘤发生和基因治疗的主要靶标[3]。本研究利用SP细胞分离法检测人表皮细胞中是否存在SP细胞，并研究该表型细胞是否表达通用干细胞标志物ABCG2、表皮干细胞标志物整合素α6和β1，为

8、进一步研究SP细胞提供线索和基础。　　1　资料与方法　　1.1　一般资料　收集山东大学齐鲁医院普外科2008年1月—2008年10月56例腹部手术患者的腹部皮肤组织。　　1.2　主要试剂与仪器　K-SFM培养基、维拉帕米(Gibco公司)，小牛血清(Hyclone公司)，中性蛋白酶、0.25%胰酶(Gibco公司)，