富血小板血浆在治疗慢性难愈创面中的应用

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1、富血小板血浆在治疗慢性难愈创面中的应用【关键词】富血小板血浆；慢性难愈创面；应用慢性难愈创面（chronicnonhealingwounds）目前尚无明确定义，通常理解为在各种内在或外界因素作用下创面不能通过正常的创面愈合进程达到愈合，进入一种病理性炎症反应状态，从而导致创面经久不愈［1］。传统的治疗对慢性难愈创面效果不佳，而生长因子的出现使创面愈合的治疗从被动转为主动，为慢性难愈创面的治疗带来了希望，但生长因子的局部应用受创面微环境影响而使其灭活快、作用时间短，难以达到预期的治疗效果，同时也受到给药途径、剂型和经济负担的限制。20世纪9

2、0年代以来，国内外一些学者发现富血小板血浆(plateletrichplasma，PRP)中含有高浓度的生长因子，随后一些学者发现PRP具有明确的促进创面愈合、成骨及软组织修复的作用和加速骨愈合的能力，它能明显缩短创面愈合时间，提高骨愈合质量，并且由于PRP完全来源于自体，无疾病传染及免疫排斥反应，制作简单，对组织损伤小，因此在临床上具有良好的应用前景［2］。本文主要对PRP的制备、成分、应用及其前景做一综述。　　1富血小板血浆Harke等［1］于1977年首次分离制备富血小板血浆(plateletrich17plasma，PRP)，成

3、功地将其用于心脏外科手术患者，避免了体外循环（cardiopulmonarybypass,CPB）期间血小板功能的损伤和术后失血。近年来自体PRP已广泛应用于心脏外科手术、口腔颌面外科以及骨组织和软组织缺损修复等，并取得满意效果。　　1.1富血小板血浆分离原理　　1.1.1目前制备PRP的方法主要有血浆分离置换法和离心分离法。血浆分离置换法是利用多功能医用血成分自动分离设备单采血小板成分，自动化程度高，制备得到的PRP血小板纯度和浓度均高，但此方法一般用于用血量较多(一般在150ml以上)或需建立静脉循环通道，采集血小板后将其他血成分回输者

4、。该设备价格昂贵，限制了在临床上的广泛应用，目前主要用于血库血小板的采集以进行成分输血。离心分离法制备PRP对设备要求低，步骤简单，其制作原理为：血液中各组分的沉降系数不同，1次离心后血液分为3层，最底层是沉降系数最大的红细胞层，最上层是血清层，交界处有一薄层(肉眼不易看见)，即富血小板层；1次离心后弃去上清层或红细胞层，然后改变离心力再次离心，使更多的血小板分离出来。进行离心分离法时通常第1次离心选择较低的离心力，以避免血小板过快沉降，而第2次离心采用较高的离心力，以促使血小板在较短时间内完全沉降。实验证明，在界面附近血小板含量最丰富，保

5、留界面以下lmm的红细胞层可大大提高血小板获得率，减少血小板耗损。17Landesberg等［2］以不同离心力和离心时间2次离心制作PRP时发现，离心力>250g会导致血小板破坏过多，而1次离心时间<5分钟时得到的PRP血小板浓度与全血无明显差异；建议1次离心后弃掉红细胞层，然后再次离心，2次离心均采用200g的离心力且离心10分钟，这样制作的PRP血小板计数明显高于全血，为全血的6.17倍，血小板回收率为86.44%。Marx等［3］在制作PRP时发现，先进行高速离心，1次离心后界面以下2mm的红细胞层血小板浓度最高，弃去上清

6、液后再次以低速离心，这样可更好地提取血小板。但多数学者研究认为，采用改良Appel法［4］，即先以低速离心后吸取全部上清液、交界层下少部分红细胞置于另一支离心管，然后高速离心，所得的血小板回收率较高。　　1.1.2PRP中血小板浓度可达全血的16倍［5］，且其含有高浓度的生长因子，主要为血小板源性生长因子(PDGF)、转化生长因(TGF)β、血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子(IGF)及表皮生长因子(EGF)等。经酶联免疫吸附试验证实，PRP中PDGF、TGFβ、VEGF和EGF的浓度为体内正常浓度的3～8倍［6］。此外，P

7、RP内的纤维网络对促进细胞粘附、防止细胞流失也具有一定作用。　　1.1.3目前，以PRP为载体的生长因子已经成功应用于临床，但都是患者自体的PRP。如果患者分离过多的血液，那么就会导致贫血或者影响身体健康。为了克服这一限制，HUANGQian17［7］设计从异体的PRP中分离生长因子。研究结果表明，从PRP中分离出来的生长因子有四个部分：A、B、C、D，其中大部分的生长因子都是在B和C部分，而且可以有效地促进细胞增殖；分离出来的生长因子，经真空冷冻干燥后储存，仍可保持原来的生物活性。　　1.2富血小板血浆凝胶的制备和激活　　无论以何种原理分

8、离的PRP，临床上PRP多以凝胶的形式应用，PRP凝胶是PRP与氯化钙和凝血酶混合而成的一种具有粘性的胶状凝块。目前已被证实最好的PRP激活剂是10mg/ml氯化钙溶液(一种枸橼