对免疫金标法检测血清结核抗体的某些改良

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1、对免疫金标法检测血清结核抗体的某些改良【关键词】肺结核ImprovementofImmunityGoldMarkMetholdExaminationSerumTuberdeAntibody　　　　Keywords:Immunitygoldmarkmethod;Serum;Tuberdeantibody　　我们在工作中发观，应用免疫金标渗滤法(以下简称金标法)快速检测血清结核抗体时，重度黄疸、溶血、乳糜血清等样本在实验过程中渗入反应膜的速度慢，观察结果时反应膜背景偏红、有的无法判断结果。因此，对原实验方法进行改进，克服样本因素对实验结果的干扰。现将结果报告如下。　　1材料与方法　　1

2、.1材料肺结核患者，按中华医学会结核病分会关于“肺结核诊断与治疗指南”［1］确诊。选择重度黄疸血清43例、溶血血清12例，乳糜血清6例，共计61例血清，-20℃保存备检。5　　1.2方法　　1.2.1原方法试剂盒由福建篮波生物研究所提供、按说明使用。　　1.2.2改良方法(以下称本法)改良要点：第一，将1∶5稀释后的(黄疸血清、溶血、乳糜血清)样本0.6ml~1．0ml经G6除菌滤膜(注射器式)，取滤液检测。第二，待滤液完全渗入滤膜后，加A液1滴~2滴洗涤后加金标二抗。第三，观察结果时，如果反应膜有残留影响结果判断，用棉签沾A液轻轻擦拭除去残留物，加A液1滴~2滴洗涤后观察结果。第

3、四，可用酶免中PBST替代A液使用。　　2结果　　2.1本法与原方法在观察结果时金标二抗残留情况比较我们对61例肺结核患者的血　　清样本(包括重度黄疸血清43例、溶血血清12例、乳糜血清6例)，用本法和原方法进行平行实验，结果如表1所示。表1：本法与原方法在结果观察时反应膜背景比方法（略）本文在应用原方法检测的21例实验结果背景偏红样本中，有14例为重度黄疸血清，6例为中度溶血血清，1例为重度乳糜血清。在6例无法判断结果的样本，分别为重度黄疸血清5例，重度溶血血清1例。　　2.2两种方法的样本完全渗入反应膜所用时间的比较5本文对22例重度黄疸血清用生理盐水1∶5稀释后直接加入实验滤

4、膜上，样本渗入反应膜所用的时间为(8．2±2．4)min；取上述22例1∶5稀释血清经G6除菌过滤后的滤液加入实验滤膜上，样本完全渗入反应膜所用的时间为(4．0±2．2)min。二者进行统计学处理，差异非常显著(P<0．01)。　　2.3本法对61例肺结核患者血清结核抗体的检测结果我们应用本法对61例血清为重度黄疸、溶血、乳糜血清的肺结核患者血清结核抗体进行检测，其结果为阳性52例，阳性率为85.1％，与文献报道一致［2］。　　3讨论　　本文实验结果表明，应用本法对61例血清为重度黄疸、溶血、乳糜血清的肺结核患者血清结核抗体进行检测，观察结果时反应膜背景偏红者为7/61(11

5、．4％)，与原方法(34．3％)相比明显减少(P<0．01)。我们对22例重度黄疸血清1∶5稀释样本完全渗入反应膜的时间进行比较，原方法为(8.2±3．4)min；本法为(4.0±2．2)min，二者差异非常显著(P<0．01)。提示本法对1∶55稀释的重度黄疸、溶血、乳糜血清样本进行过滤，取滤液进行测定，减少了样本中大分子物质对实验的干扰，使样本渗透入反应膜的速度加快，观察结果时反应膜背景更为清晰。我们在研究中发现，部分经过G6除菌过滤后的重度黄疸、溶血样本，在样本完全渗入反应膜后，其膜上仍有部分黄色、红色残留物，滴加1滴~2滴A液洗涤可除去上述残留物，再加B液，实验

6、结果容易判断。我们在工作中曾经用本法对结核性胸膜炎患者胸腔积液结核抗体进行检测［3］，获得了满意的效果。我们用棉签沾少量A液擦拭残留在反应膜上的金标二抗时发现，特异性结合(阳性反应)金标二抗不容易被擦拭；而残留在反应膜上的金标二抗容易被擦拭。我们应用本法对61例血清为重度黄疸、溶血、乳糜血清的肺结核患者血清结核抗体进行检测，其结果为阳性52例，阳性率85．1％，与文献报道一致。表明本法可以减少或克服黄疸、溶血、乳糜血清对实验的干扰，实验结果可靠。　　参考文献：　　［1］中华医学会结核病分会.肺结核诊断与治疗指南［S］.中华结核和呼吸杂志，2001，24：70.　　［2］唐少华，郑延

7、迪.斑点免疫金渗滤法检测结核抗体［J］.上海医学检验杂志，1998，13：46.　　［3］5吴松远，石贺芹，夏其海，等.结核分枝杆菌抗体检测在胸腔积液中的应用及影响因素的探讨［J］.实用诊断与治疗杂志，2003，17：205.5