两种提取家蝇幼虫血淋巴方法的比较

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1、两种提取家蝇幼虫血淋巴方法的比较【摘要】　　目的：对剪头法和瞬时破壁法提取的家蝇幼虫血淋巴粗提液进行蛋白浓度和SDS-PAGE分析比较。方法：分别采用剪头法和瞬时破壁法提取家蝇幼虫血淋巴粗提液，同时设立未诱导组和热诱导组，测定各组的蛋白浓度进行比较分析，并对各组血淋巴粗提液进行SDS-PAGE的分析比较。结果：剪头法热诱导组的血淋巴粗提液蛋白浓度高于未诱导组，瞬时破壁法提取的血淋巴粗提液蛋白浓度高于剪头法；经SDS-PAGE分析，瞬时破壁法提取的血淋巴粗提液蛋白条带明显多于剪头法。结论：瞬时破壁法提取家蝇幼虫血淋巴简便易行，所提取的血淋巴蛋白成分多于剪头法。【关键词】家蝇；幼虫；血淋巴　　［

2、Abstract］Objective:Tocomparetwomethodsforcollectinghemolymphofhouseflylarvae.Methods:Twomethods,beheadingandtransientbodywallbreakingdown(TBB),werecomparedbycomparingthetotalhemolymphvolume,proteinconcentrationandproteinbandsonSDS-PAGEjellofcollectionsrespectivelybythetwomethods.Houseflylarvaeintwo

3、states:heatinducedandnon-inducedwereusedineachmethodexperiment.Results:Thehemolymphproteinconcentrationofheat-inducedlarvaecollectedbybeheadingwashigherthanthatof10non-inducedlarvae;ThehemolymphproteinconcentrationcollectedbyTBBmethodwashigherthanthatcollectedbybeheadingmethod;ThebandsonSDS-PAGEjel

4、lofhemolymphcollectedbyTBBmethodweremorethanthosecollectedbybeheadingmethod.Conclusion:TBBmethodismoresimpleandconvenientforcollectingthehouseflylarvaehemolymph,andthehemolymphproteiningredientsarericherthanthosecollectedbybeheadingmethod.　　［Keywords］houseflies;larvae;hemolymph　　家蝇（Muscadomestica）是

5、一种重要的医学昆虫，在人工大规模高密度饲养条件下，也很少集体染病，具有较高地免疫防御机制，国内外学者已从家蝇幼虫的血淋巴中分离到多种抗细菌肽和抗真菌肽等活性肽类物质[1~5]。目前对家蝇幼虫血淋巴的提取收集主要有剪头法、研磨法、匀浆法等，后两种方法提取的成分更近似于家蝇幼虫的匀浆液。本研究采用沸水瞬时处死幼虫后再瞬时离心，即瞬时破壁法，提取液更接近血淋巴成分，操作也比剪头法简便易行。为探讨瞬时破壁法提取血淋巴的优缺点，采用剪头法和瞬时破壁法提取家蝇幼虫血淋巴，并设立未诱导组和热诱导组，对所提取制备的的血淋巴粗提液进行分析比较，报告如下。1材料与方法10　　1.1家蝇来源及饲养驯化家蝇由本院寄

6、生虫学教研室2000年建立种群，由本实验室饲养传代，幼虫按常规方法饲养至3龄（孵化后第4天）备用。　　1.2试剂　　BCA蛋白检测试剂盒是美国Pierce公司产品，丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、Tris、Tricine、过硫酸铵是AMRESCO公司产品，TEMED是Sigma公司产品，SDS是Sino-AmericanBiotechnology公司产品，肽类分子量标准是安玛西亚公司产品，蛋白质分子量标准由上海生物化学研究所生产，其他试剂均为国产分析纯。实验用水均为Millipore超纯水。　　1.3仪器　　Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司），电泳仪、电泳槽（北京六一厂），541

7、5R冷冻离心机（德国Eppendorf公司）。　　1.4方法　　1.4.1家蝇幼虫的准备10　　分为未诱导组和热诱导组。未诱导组即3龄家蝇幼虫；热诱导组取3龄家蝇幼虫置于65℃电热恒温箱中1min，再于室温下静置5min，重复3次；最后置于65℃诱导5min，取出后将幼虫放入饲料中继续饲养24h后备用[6]。　　1.4.2家蝇幼虫血淋巴粗提液的制备　　（1）剪头法：取准备好的家蝇幼虫洗净后，用滤纸将体表水分蘸