川芎嗪对t淋巴细胞活化增殖的影响

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1、川芎嗪对T淋巴细胞活化增殖的影响作者：张涛赵蕊柳朝阳商宇王茉琳王小灵【摘要】目的观察川芎嗪(LTZ)对大鼠T淋巴细胞活化增殖的影响。方法将指数生长大鼠脾淋巴细胞与不同浓度的LTZ共培养，用MTT法观察LTZ对大鼠T淋巴细胞的增殖作用。无菌分离大鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞，以0.25、0.5、1mmol/LLTZ预培养60min后，分别加入刀豆蛋白(ConA)继续培养48h，以抗大鼠CD3和CD71单抗标记后，采用流式细胞术检测各组CD3+CD71+表达情况。结果不同浓度LTZ呈浓度依赖性抑制T淋巴细胞

2、增殖；ConA刺激可显著升高CD3+CD71+表达(均P＜0.01)，1、0.5mmol/LLTZ可显著抑制ConA刺激下的CD3+CD71+表达(P＜0.01)0.25mmol/L作用逐渐减弱，呈一定的量效关系。结论LTZ可抑制T淋巴细胞活化和增殖，其作用可能与下调T细胞转铁蛋白受体的表达，减少细胞对铁离子摄入有关。【关键词】川芎嗪；类风湿关节炎；T淋巴细胞；活化增殖川芎嗪(LTZ)主要用于治疗多种心血管疾病〔1，2〕，对类风湿性关节炎(RA)的作用研究较少。本研究观察了LTZ对淋巴细胞活化增殖

3、和T淋巴细胞表面CD71表达的影响,探讨LTZ治疗RA的机制。1材料与方法61.1药物和试剂盐酸川芎嗪由北京第四制药厂生产，刀豆蛋白(ConA)、四甲基偶氮唑盐(MTT)及其衍生物(XTT)均购自美国Sigma公司；环磷酰胺(cy)为上海华联制药公司产品；RPMI1640完全培养液、胎牛血清购自美国Gibco公司；单克隆抗体antiratCD3异硫氰酸荧光素(FITC)、antiratCD71藻红蛋白(PE)均购自Pharmingen公司，为上海华联制药公司产品。1.2动物清洁级Wis

4、tar大鼠由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。1.3试验方法1.3.1LTZ对T淋巴细胞的增殖作用〔3〕取大鼠脾脏用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液配成5×106ml细胞悬液，将大鼠脾细胞悬液(终浓度2.5×106ml)点于96孔培养板上,每孔100μl,再加入50μlConA及不同浓度LTZ药液，放入37℃、5%CO2孵箱中培养6h,每孔加入XTT20μl,培养6h,在酶标仪上以450nm测各孔A值,结果以增殖率表示。增殖率(%)=实验孔A值对照孔A值对照孔A值×100%。61.3.2T

5、细胞CD71的表达大鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞加ConA后分别培养20、24、48、72h后，加入antiratCD3FITC和antiratCD71PE各10μL，避光放置30min，PBS洗涤后，40g/L多聚甲醛PBS固定,采用流式细胞仪检测CD3+CD71+表达情况。取24孔培养板,每孔加大鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞1ml(终浓度1×109/L),先加不同浓度LTZ预培养60min,PBS对照组加入相同容积的PBS；分别加入ConA(终浓度为10mg/L)，37℃、体积分数5%CO2

6、条件下培养48h后加入antiratCD3FITC和antiratCD71PE各10μl,避光放置30min；PBS洗涤后，40g/L多聚甲醛PBS固定，采用流式细胞仪检测各组CD3+CD71+表达情况。1.4统计学方法采用SPSS11.0统计软件，试验结果进行组间t检验。2结果2.1LTZ对T淋巴细胞的增殖作用LTZ在0.25～1mmol/L浓度范围内可浓度依赖性地对ConA所诱导的T淋巴细胞增殖发生抑制作用，具有量效关系，见表1。2.2ConA及LTZ对CD3+T淋巴细胞表达CD

7、71的影响ConA刺激前CD3+T淋巴细胞CD71表达阳性率为（1.68±0.59)%，刺激20、24、48、72h后CD3+T淋巴细胞表达高水平CD71，其阳性率分别为（85.30±0.86）%、(85.96±1.20)%、(88.32±2.34)%、(99.45±63.13)%，其中20、24、48h呈一个平台期。应用1、0.5、0.25mmol/LLTZ对ConA刺激下CD3+CD71+表达有显著抑制作用，其表达阳性率分别降至（30.26±1.62）%、（48.18±1.40）%、（72.1

8、8±2.43）%(均P＜0.01)，其中1、0.5mmol/LLTZ组与阳性对照组〔（2.70±0.05）%〕及PBS对照组〔（71.56±1.34）%〕比较有显著性差异(均P＜0.01)，且呈一定的量效关系。表1LTZ对T淋巴细胞的增殖作用3讨论一般认为T淋巴细胞(T细胞)在RA的发病中起着中心性的作用,异常的T细胞在趋化因子的介导下选择性地进入关节滑膜,成为浸润滑膜的主要细胞种类。这些高度活化的T细胞通过激活巨噬细胞、T细胞及滑膜细胞,引起各种细胞因子、抗体和酶类释放,由此产生