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1、光合细菌分离鉴定及其快速培养的研究摘要:对能净化养殖水的光合细菌进行了研究,分离得到菌株B3,鉴定该菌为沼泽红假单胞菌(Rhodorse“domon。p以。tris)〕通过一系列的试验确定了菌株B3的最佳培养条件,实现菌株B3的快速培养,为菌株B3进一步的应用提供了理论上的依据。关键词:光合细菌;水产养殖;快速培养;研究1引言近年来我国水产养殖业的发展蒸蒸日上,但从长远来看将会面临由人为和自然造成的池塘老化,水质恶化,有机污染严重,致病微生物大量滋生,以致形成大量病害的危险。这些病害会造成巨大的经济损失L’一2〕,故改善水产养殖水域的水
2、质状况已成为养殖业生产发展的关键技术和研究热点。光合细菌是一类能进行光合作用的有益细菌,广泛分布于水田、坑塘、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中[’l。光合细菌具有改善水质的能力,而且有较高蛋白含量,并能促进水产品的生长繁殖,故在水产养殖中具有广泛的应用前景。因此分离得到高效净化水产养殖水质的光合细菌,对我国的水产养殖有着重要的意义〔4了。2材料和方法2,1材料2.1.1菌种来源购得具有高效净化水产养殖的光合细菌菌液(深红色菌液)。2.1.2培养基分离培养基:乙酸钠3.09,丙酸钠0.39,NaCI0.59,NH;CI19,MgSO4·
3、7HZO0.29,KZHPO4o·39,KH尹0;0.59,CaCI:0.059,MnCI:·4HZO0.0039,reso4·7HZo0.0059,酵母膏0.19,蛋白脉0.019,谷氨酸0.2x10一,g,HZO1000mL,琼脂209,pH7.2一7.4,121℃温度下高压灭菌30min。液体培养基:Mgso4·7HZo0.29,NH不119,NaZCO359,KZHpo40.59,NaCI0.59,蛋白陈1.59,H必1000mL,pH7.2,121℃温度下高压灭菌30min。碳源和电子供体:苯甲酸、柠檬酸钠、乳酸钠、乙酸钠、丙
4、酸钠、甘油、丙酮酸、苹果酸、甲醇、甘露醇、硫代硫酸钠。2.2实验方法2.2.1缺氧条件的建立在分离纯化细菌过程中,采用双层培养基法;在将光合细菌转接到液体培养基过程中,则采用液体培养基注人厌氧管且仅留15一3mL的空间的方法。2.2.2光合细菌的分离纯化取上述深红色菌液,采用双层培养基平板法进行分离。通过观察,挑取红色单菌落,重复进行平板划线分离,得菌株B3。2.2.3菌落及菌体形态的观察观察双层培养基中菌落形态;用荧光显微镜观察(型号为OLYMPUSBX一50)菌体形态。2.2.4革兰氏染色试验试验方法详见《污染控制微生物学实验》图。
5、2.2.5B3菌体DNA的提取及其G十Cmol%的测定B3菌体DNA的提取采用林万明的方法,G十Cmol%的测定采用热变性温度法囚。2.2.6碳源和电子供体利用试验在每支厌氧管中分别加人各种碳源和电子供体,然后接种B3进行光照培养,几天后观察其结果。2.2.7细菌鉴定参照上述试验结果,根据《伯杰细菌鉴定手册》籍缪儡毓黔进(8版)[v]和《常见细菌系统鉴定手册》川进行鉴定表1菌株B3对碳源和电子供体的利用情况2.2.8菌株B3快速培养条件的确定在不同的培养条件下,pH值、光照类型、光照时间、NaCI浓度、酵母膏浓度,确定光合细菌最佳生长条
6、件。采用722型光栅分光光度计测定光合细菌的OD值。最大吸收波长的确定。以未接菌的液体培养基为空白对照,选择不同的波长(660,666,670,674,676,675,650,690nm)测定菌液的OD值。oD最大值所对应的波长为该菌的最大吸收波长图。光照类型对菌株B3生长情况的影响。采用白炽灯、日光灯、自然光3种光照类型对菌株B3进行光照培养,培养温度控制在(30士2)℃(以下的试验均控制在这个温度),pH值调节为7.2,然后测定菌株B3在48,%,144h的OD值,观察其生长情况。pH值对菌株B3生长情况的影响。调节液体培养基的pH
7、值,分别为6.9,7.2,7.5,7.8,8.1,在白炽灯下光照,测定菌株B3的OD值,观察其生长情况。光照时间对菌株B3生长情况的影响。接种菌体后,分别在48,96,144,192,240h测定菌株B3的OD值,观察其生长情况。NaCI浓度对菌株B3生长情况的影响。配置分别含0.1%,0.5%,1.0%,2.0%,3.0%,4.0%NaCI浓度的液体培养基,对光合细菌进行适应盐浓度能力试验,经光照培养4d后,测定OD值,观察菌体生长‘清况[101。酵母膏浓度对菌株生长情况的影响。在液体培养基中加人酵母膏,使其质量分数分别为0.01%,
8、0.03%,0.05%,0.08%,0.10%,0.15%,0.20%,0.25%,0.30%,0.35%。光照培养4d,测定On值,观察菌体生长情况[l]。3结果与讨论3,1细菌鉴定菌落:在分离培养基中菌
