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1、副溶血性弧菌论文：副溶血性弧菌FlaE蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备【中文摘要】副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus,VP)是存在于近岸海洋环境的嗜盐细菌,它常常因为污染海味食品而引起人类急性胃肠炎,也可引起反应性关节炎,是一种重要的食源性致病菌。副溶血性弧菌具有极性鞭毛和周身鞭毛两个鞭毛系统以适应不同环境,其鞭毛蛋白有良好的免疫原性,可作为抗原制备抗体。本实验通过构建原核表达极性鞭毛FlaE蛋白的重组大肠杆菌,经IPTG诱导表达并通过亲和层析纯化获得蛋白,以其作为抗原制备多克隆抗体,为制备免疫磁珠,建立VP的快速富集和检测奠定基础。本实验主要得研究内
2、容和结果如下：经Genebank中查得Vibrioparahaemolyticus,BB22菌株极性鞭毛基因FlaE基因序列(登录号为U12817.2),设计引物,利用PCR方法采用高保真酶从标准株ATCC17802基因组中扩增出flaE基因片段,回收所得的扩增产物与pMD19-Tvector连接,转化大肠杆菌DH5a,利用氨苄青霉素、蓝白斑筛选和菌落PCR初步确认阳性重组子,随后进行测序鉴定。测序结果表明基因全长1122bp,与Genebank上VP.BB22flaE基因片段同源性达98%...【英文摘要】Vibrioparahaemolyticusisagram-negativ
3、e,halophilicbacteriumwhichiswidelydistributedovercoastalarea,andisalsoafood-bornepathogencausinghumanacutegastroenteritisandreactivearthritis.V.parahaemolyticuspossessesdualflagellarsystemsadaptedformovementunderdifferentcircumstances.Flagellarproteincanbeutilizedtoproduceantibodiesduetoitshig
4、himmunogenicity.Inthiswork,recombinantbacteriaexpressingflaEgeneofV.parahaemolyticuswereconstructedsuccessfully,and...【关键词】副溶血性弧菌flaE基因原核表达亲和纯化【英文关键词】V.parahaemolyticusflaEgeneprokaryoticexpressionaffinitypurification【索购全文】联系Q1：138113721Q2：139938848同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发【目录】副溶血性弧菌FlaE蛋白的原核表
5、达、纯化及其多克隆抗体制备摘要4-5Abstract5缩写词表9-11第一章绪论11-181.副溶血性弧菌简介11-161.1副溶血性弧菌的危害111.2副溶血性弧菌的鞭毛系统11-141.2.1鞭毛系统的基因组11-131.2.2极性鞭毛的结构和组装13-141.2.3副溶血性弧菌鞭毛的功能141.3.副溶血性弧菌的检测方法14-161.3.1传统检测方法14-151.3.2PCR检测法151.3.3基因芯片151.3.4免疫分析检测15-162.本实验的目的和意义16-18第二章.副溶血性弧菌flaE基因的克隆及表达载体的构建18-311材料与方法18-231.1材料18-19
6、1.1.1菌株与质粒181.1.2主要实验材料181.1.3主要试剂和培养基18-191.2方法19-231.2.1引物设计与合成191.2.2PCR扩增191.2.3琼脂糖凝胶电泳191.2.4PCR产物的回收与纯化19-201.2.5目的片段和克隆载体的连接201.2.6连接产物转化大肠杆菌DH5a20-211.2.7克隆重组子的鉴定21-221.2.8表达系统的构建22-232结果与分析23-302.1副溶血性弧菌flaE基因的PCR扩增23-252.2克隆载体的构建及鉴定25-272.3目的片段的序列分析27-292.4表达载体的构建29-304.本章小结30-31第三章副
7、溶血性弧菌flaE基因的原核表达、蛋白纯化及其多克隆抗体的制备31-441.材料与方法31-371.1材料31-321.1.1菌株与质粒311.1.2主要实验材料311.1.3主要实验试剂31-321.1.4主要设备321.2方法32-371.2.1蛋白的诱导表达32-331.2.2融合蛋白的纯化33-341.2.3纯化蛋白的含量测定34-351.2.4FlaE蛋白多克隆抗血清制备35-361.2.5ELISA检测36-372结果与分析37-432.1大肠杆菌BL21
