实验室常用试剂、缓冲液的配制方法

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1、附录一实验室常用试剂、缓冲液的配制方法(一)1MTris-HCl(1L)1.称量121.1gTris置于1L烧杯中2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解；3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值；PH值浓HCl7.4约70mL7.6约60mL8.0约42mL4.将溶液定容至1L；5.高温高压灭菌后，室温保存；注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1°C，溶液的pH值大约降低0.03个单位。(二)0.5MEDTA(1L)1.称取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L烧杯中；2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌；

2、3.用NaOH调节pH值至8.0(约20gNaOH)；注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解；4.加去离子水将溶液定容至1L；5.适量分成小份后，高温高压灭菌；6.室温保存。(三)50×TAEBuffer(pH8.5)(1L)1.称量下列试剂，置于1L烧杯中；Tris242gNa2EDTA.2H2O37.2g2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解；3.加入57.1mL的醋酸，充分搅拌；4.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。(一)10×TBEBuffer(pH8.3)(1L)1.称量下列试剂，置于1L烧杯中；Tris108gNa2EDTA.2H2O7.44g硼

3、酸55g2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解；3.去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。(二)40%丙烯酰胺(1L)1.称量下列试剂，置于2L烧杯中；丙烯酰胺Alrylamatide380g甲叉丙烯酰胺Bis-Alrylamatide20g2.向烧杯中加入约400mL的去离子水，充分搅拌溶解；3.去离子水将溶液定容至1L；4.37°C过夜，充分溶解。(三)8%非变性聚丙烯酰胺凝胶(70mL)1.40%丙烯酰胺、TEMED和10%APS均放置于4°C冰箱中，要用时才取出；2.按照顺序称量下列试剂，置于200mL烧杯中；去离子水41mL5×TBEBuffer14mL40%

4、丙烯酰胺14mL10%APS650μLTEMED65μL3.磁力搅拌器将其充分混合均匀(注意控制时间，特别是室温高的时候，容易凝结)；1.将其缓慢倒入电泳玻璃板中。(一)6×LoadingBuffer(500mL，DNA电泳用)1.称量下列试剂，置于1L烧杯中；EDTA4.4gBromophenolBlue250mgXyleneCyanolFF250mg2.向烧杯中加入约200mL的去离子水，加热充分搅拌溶解；3.加入180mL甘油后，使用2NNaOH调节pH值至7.0；4.去离子水将溶液定容至500mL后，室温保存。(二)10×LoadingBuffer(10mL，RNA电泳用)1

5、.称量下列试剂，置于10mL离心管中；0.5MEDTA(pH8.0)200μLBromophenolBlue25mgXyleneCyanolFF25mg2.向烧杯中加入约4mL的DEPC处理水，充分搅拌溶解；3.加入5mL甘油后，充分溶解；4.DEPC处理水定容至10mL后，室温保存。(三)组织裂解液(100mL，鱼类用)1.按照顺序称量下列试剂，置于200mL烧杯中；1MTris-Cl(pH8.0)1mL0.5MEDTA1mL0.5MNaCl20mL10%SDS10mL2.加去离子水将溶液定容至100mL。(四)Hank’s液(1L，淡水鱼用)1.按照顺序称量下列试剂，置于2L烧杯

6、中；NaCl8.0gKCl0.2gMgSO4.7H2O0.26gNaH2PO4.2H2O0.065gNaHCO31.0gCaCl20.2g2.充分搅拌至前部溶解；3.加去离子水将溶液定容至1000mL，4°C保存。