耐药细菌及检测(2)

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1、耐药细菌及检测（2）写在课前的话随着多重耐药或经耐药细菌在教学医院以及综合性医院的流行，院内感染的机会也在不断的增多。一些对青霉素和大环内酯类耐药的肺炎链球菌，对三代头孢菌素耐药的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌，以及对碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌等耐药菌株的流行，加之一些新的病原微生物的不断出现，给临床对感染性疾病的诊断和治疗增加了难度。一、耐药细菌的检测细菌的耐药机制各异，针对具有特定耐药机制的细菌的检测方法也是不同的。耐药细菌的检测，主要是采用抗菌药物的敏感试验。具体方法主要有扩散法、稀释法、E-test法、自动微生物分析仪检测以及分子生物学方法。（一）方法1、扩散法

2、这种方法是将抗菌药物纸片贴到已经涂布有待检细菌的MH碟子上，通过孵育以后，观察抑菌圈直径，以mm表示，这是一种定性的方法。2、稀释法稀释法主要是将抗菌药物的浓度做不同稀释，然后来测定这些不同浓度的抗菌药物对细菌的抑菌作用。通过孵育培养以后，观察最低抑菌浓度，即MIC值，以μg/ml表示，这是定量的方法。3、E-test法E-test法主要是综合了扩散法和稀释法的优点，它是把抗菌药物以不同的浓度放在了一个E-test条上，把E-test条直接放在涂有细菌的碟子上，那么可以观察E-test条上抗菌药物与细菌之间相互作用以后，所获得的椭圆形的抑菌圈，来测定一个MIC值，因此这也是一种定量的方法。4

3、、自动微生物分析仪自动微生物分析仪，例如现在很多实验室使用的ViteK,Microscan等，这些微生物分析仪可以给出抗菌药物对于某种细菌的特定的抑菌值，也是MIC值的一种检测方法。5、分子生物学方法分子生物学方法主要是测定耐药细菌的一些耐药基因，比如说mecA基因，当然对于某些耐药基因的检测，应该注意这些耐药基因是否有表达，它们是否是“沉默”的基因。（二）解释性分类通过药敏试验我们可以获得定性的结果即抑菌圈的直径，或者是定量的结果，即最低抑菌浓度MIC值。如何将药敏试验结果的值转换成临床容易接收的结果？在药物敏感试验的判读当中，我们就有一个遵循的标准。在我们国家，多数实验室都是遵照着美国临

4、床微生物实验室标准化委员会所给出的解释性的分类标准。通过这个标准我们就可以把药敏试验最终判定为敏感（S）、中介（I）、或者是耐药（R）。1、敏感（S）敏感就是指的针对感染部位，使用推荐剂量的抗菌药物所达到的浓度能够使细菌受到抑制。2、中介（I）中介则是指需要用高于正常剂量的抗菌药物才会有效。或者是一些抗菌药物在机体的特定部位可以浓集，例如当尿路感染时使用喹诺酮类和ß-内酰胺类抗菌药物，它们可以在尿液中进行浓集。中介同时也代表了试验的缓冲区，主要是为了防止微小的未能控制的影响因素造成一些重大的结果解释错误。3、耐药（R）耐药，则是指所测试的抗菌药物对病人的治疗很可能会失败。（三）药敏试验结果与

5、参考结果的比较1、定量试验药敏结果是否正确，对于临床抗感染治疗起着很重要的指导作用。要使药敏结果能够真正的发挥对临床的指导作用，我们要进行相应的质量控制，也要评比我们的试验结果与参考结果的一致性。从定量试验方法来看，如果我们检测的结果，与参考的结果相差在一个稀释度范围内，比如说检测结果是1或者是4，而参考结果是2，则这个检测结果跟参考结果是基本一致。当检测结果与参考结果的值是完全相同的，如都是2μg/ml，则检测的结果与参考结果就是完全一致的。2、定性试验当进行定性试验的时候，我们将检测结果做了大的分类。当检测结果与参考的结果在分类上是相同的，例如检测与参考的结果都是敏感，或者是检测结果与参

6、考结果都是耐药，那么就是说检测结果与参考结果是一致的，这是可以接受的。当检测结果为敏感，而参考结果为耐药时，这种情况就成了极重大的错误。因为临床很可能根据实验室报告的敏感结果选用这一类抗菌药物对病人进行治疗，而我们的报告跟参考结果是完全不一样的，在分类上出现了很大的误差，那么对病人的治疗很可能就是无效的，就像参考结果中所指的，这是一株耐药的细菌，所以这种情况我们应该避免。还有重大错误，就是检测结果是耐药，而参考结果是敏感。这种时候临床就可能不用我们所报告的耐药的抗菌药物，而去用其他敏感的抗菌药物，但是当病人在其他抗菌药物都是耐药的情况下，医生就很难选择出有敏感的抗菌药物，因此这种情况我们也应

7、该尽量的避免。小错误，就是指检测结果和参考结果在分类上是接近的，例如检测结果是耐药或者是敏感，而参考结果是中介或者相反，检测结果是中介，而参考结果是耐药或者是敏感。二、几个主要的细菌耐药问题（一）MRSA1、检测方法MRSA的细菌检测的一个简单的方法就是在涂有待检金葡菌的MH碟子上放上含有30μg头孢西丁的纸片。通过培养24小时以后，观察头孢西丁抑菌圈的直径大小，当抑菌圈直径≤21mm的时候，我们认为这是一株