叶绿素a的测定(b)

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1、内江市环境保护监测站实验报告分析人员：质量负责人：技术负责人：报告单位：内江市环境保护监测站报告日期：2010年8月2日叶绿素a的测定（B）一、样品名称：叶绿素a编号：叶绿素a考核任务来源：四川省环保厅上岗考核组实验目的：四川省监测人员上岗考核实验日期：2010年7月27日报告日期：2010年7月27日二、实验目的叶绿素是植物光合作用中的重要光和色素。通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产力情况。在环境监测中，可将叶绿素a含量作为湖泊富营养化的指标之一。三、水样的采集与保存可根据工作的需要进行分层采样或混合采样。湖泊，水库采样500ml，池塘300ml，采样量视浮游

2、植物的分布量而定，若浮游植物数量较少，也可采样1000ml。采样点及采样时间同“浮游植物”。水样采集后应放置在阴凉处，避免日光直射。最好立即进行测定的预处理，如需进过一段时间（4~48h）方可进行预处理，则应将水样保存在低温（0~4℃）避光处。在没升水样中假如1%碳酸镁悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。水样在冰冻情况下（-20℃）最长可保存30d。四、仪器设备（1）分光光度计（2）真空泵（1）离心机（2）乙酸纤维滤膜（孔径0.45ug）（3）抽滤器（4）组织研磨器或其他细胞破碎器（5）碳酸镁粉末（6）90%丙酮五、实验步骤(1)以离心或过滤浓缩水样，在抽滤器上装好乙酸

3、纤维滤膜。倒入定量体积的水样进行抽滤，抽滤时负压不能过大（约为50kpa）。水样抽完后，继续抽1~2min，以减少滤膜上的水分。如需段时期保存1~2d时，可放入普通冰箱冷冻，如需长期保存（30d），则应放入低温冰箱（-20℃）保存。(2)取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6~8h后放入组织研磨器中，加入少量碳酸镁粉末及2~3ml90%的丙酮，充分研磨，提取液绿色a。用离心机（3000~4000r/min）离心10min。将上清液倒入5ml或10ml容量瓶中。(3)再用2~3ml的90-%的丙酮，继续研磨提取，离心10min，并将上清液再转入容量瓶中。重复1~2次，用

4、90%的丙酮定容为5ml或10ml，摇匀。(4)将上清液在分光光度计上，用1cm光程的比色皿，分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度，并以90%的丙酮做空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。六、计算方法叶绿素a的含量按如下公式计算（11.64×(D663-D750)—2.16×（D645-D750）+0.10×（D630-D750））.V1叶绿素a（mg/m3）=——————————————————————————————V.δ式中：V——水样体积（L）D——吸光度V1——提取液定容后的体积（ml）δ——比色皿光程（cm）