urocortin对大鼠焦虑样行为及中缝背核、海马ca区-ht表达的影响

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1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。Ｚ论文作者签名：墨丝Ｉ日期：车：￡鲨中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国

2、医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容（保密内容除外），以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：盗垦指导教师签名：日期：’汹・中文论著摘要・Ｕｒｏｃｏｒｔｉｎ３对大鼠焦虑样行为及中缝背核、海马ＣＡ３区５－ＨＴ表达的影响前言动物焦虑模型的发展，为研究动物焦虑样行为以及应激行为反应的机理，提供了广阔的空间。近几年，有关促肾上腺皮质激素释放因子（ＣＲＦ

3、）肽家族在动物焦虑模型领域中的研究不断深入。ＣＲＦ肽家族包括ＣＲＦ、ｕｒｏｃｏｒｔｉｎ１（ＵＣＮ１）、ｕｒｏｃｏｒｔｉｎ２（ｕｃＮ２）、ｕｒｏｃｏｒｔｉｎ３（ＵＣＮ３）。ＵＣＮ３是ＣＲＦ肽家族的新成员・是ＣＲＦ２受体的内源性配体。目前有关ＵＣＮ３在应激反应中作用的结论不一，其具体作用机制也不详。本实验欲采用经典动物焦虑模型——十字架空装置模型（ｅｌｅｖａｔｅｄｐｌｕｓｍａｚｅｔｅｓｔ，ＥＰＭ），评估ＵＣＮ３对焦虑样行为的调节。目前有研究结果表明ＣＲＹ肽家族除了与自身受体结合发挥作用外，与中枢神经系统５－羟色胺（５－ＨＴ）神经递质也存在相互影响。本研究欲观察ＵＣＮ３

4、在调节应激行为反应的同时，对中缝背核（ＤＲＮ）和海马ＣＡ３区的５．ＨＴ表达的影响。为探讨ＵＣＮ３、ＣＲＦ２受体对应激反应的调节以及新型抗焦虑药物的开发提供理论依据。实验材料１、实验动物采用Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠３６只，体重１９０．２１０９，由中国医科大学实验动物中心提供。２、主要试剂ＵＣＮ３购于Ｓｉ粤ｍ公司，兔抗鼠５一ＨＴ多克隆抗体、生物素标记的山羊抗兔ＩｇＧ、ＳＡＢＣ（链霉素过氧化物复合物）免疫组化试剂盒、ＤＡＢ显色剂均购于Ｂｏｓｔｅｒ公司。３、主要实验仪器立体定位仪（日本Ｎａｒｉｓｈｉｇｉ公司），十字架空装置，冰冻切片机，ＭｅｔａＭｏｒｐｈ／ＣｏｏｌＳｎａｐｆｘ／Ａ

5、ｘ７０计算机图像分析系统。实验方法１、手术留置套管将大鼠腹腔注射２０％水合氯醛（０．２ｍｌ／１００９）麻醉后，固定于立体定位仪上，切开颅骨顶部皮肤筋膜，确定侧脑室位置，用牙科钻钻孔，将套管置于脑室内，用牙科水泥将套管固定于颅骨上，封闭套管。术后大鼠单笼饲养，恢复７天。２、动物分组实验当日将大鼠随机分为三组，ＵＣＮ３组１２只，对照组１２只，空白组１２只。ＵＣＮ３组侧脑室注射１０ｕｇ／５ｕｌＵＣＮ３，对照组和和空白组分别注射５ｕｌ生理盐水・３、行为学评价侧脑室注射１０分钟后，用十字架空装置评价ＵＣＮ３组和对照组的焦虑样行为的变化。４、检测５－ＨＴ在ＵＣＮ３组和对照组行为学

6、评价后２小时，空白组侧脑室注射生理盐水后２．５小时，全部大鼠经多聚甲醛灌流固定，剥取中脑及杏仁海马区，制作含中缝背核、海马的冰冻切片，采用特异性抗体的免疫组织化学方法检测中缝背核、海马ＣＡ３中的５－ＨＴ样阳性物质的表达。实验结果ｌ、在ＥＰＭ中焦虑样行为的比较与对照组相比，ＵＣＮ３组大鼠在ＥＰＭ中的开放臂停留时间延长（睨．４５，Ｐ＜０．０５），开放臂停留时间百分比增多（睨．７５，Ｐ＜０．０５），进入开放臂次数百分比增加（ｔ－－－０．７８，Ｐ＜０．０５）。２、ＵＣＮ３对中缝背核、海马ＣＡ３区５－ＨＴ表达的影响２ＵＣＮ３组ＤＲＮ区５－ＨＴ表达的ＯＤ值和阳性细胞数与对照组相比

7、显著增加（睨．２９，Ｐ＜０．０５），（戡．２３，Ｐ＜０．０５）。ＵＣＮ３组海马ＣＡ３区５．ＨＴ表达的ＯＤ值和阳性细胞数与对照组相比显著增加（ｔ－－，４．４６，Ｐ＜０．０１），（ｔ－＝１６．９７，Ｐ＜０．０１）。３、ＥＰＭ对中缝背核、海马ＣＡ３区５一ＨＴ表达的影响对照组与空白组比较，对照组在ＤＲＮ、海马ＣＡ３中５．ＨＴ表达的ＯＤ值和阳性细胞数有所减少但未达到统计学差异（Ｐ＞ｏ．０５）。讨论十字架空装置的主要原理在于啮齿类动物既有针对新异环境的探究心理，同时又有针对高悬和空旷环境的恐惧心理，从而营造出令啮齿类动物矛盾的焦虑状态。因此，在十字架空装置中，