血库技术操作规程

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1、ABO血型正定型操作规程1、原理根据红细胞表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正定型鉴定ABO血型。正定型用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原。2、试剂2.1抗A、抗B血型定型试剂，有批文准号。2.2受检者3~5%红细胞盐水悬液。3、操作3.1试管法3.1.1取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，用滴管分别滴加抗A、抗B分型试剂各一滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者3~5%红细胞盐水悬液1滴混匀。3.1.2立即以10

2、00r/min离心1分钟。3.1.3将试管从离心机取出，轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象。如肉眼未见凝集，应将反应物倒于玻片上，以低倍镜观察。3.1.4观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。3.1.5凝集强度判断标准4+：红细胞凝集成一大块，血浆清晰透明。3+：红细胞凝集成数小块，血浆尚清晰。2+：红细胞凝块分散成数小块，周围可见到游离红细胞。1+：肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有

3、很多游离红细胞。MF：即混合凝集外观，是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。—：镜下未见凝集，红细胞均匀分布。3.2玻片法3.2.1取清洁玻片一张（或凹玻板），用记号笔划成方格，标明抗A、抗B，分别滴加抗A、抗B血清一滴于相应的方格内，再加受检者5%红细胞悬液一滴混匀。3.2.2将玻片（或凹玻板）不断轻轻转动，使血浆与细胞充分混匀，连续1~5分钟，肉眼观察有无凝集或溶血反应，再在低倍镜下观察结果。ABO血型反定型操作规程1、原理用已知的A1、B细胞测定被箭血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结

4、合正定型结果判断ABO血型。2、试剂为成熟市售标准红细胞，主要组成组分为：A1、B型红细胞，葡萄糖、枸橼酸、核苷酸、抗生素等。3、样本要求被检血清或血浆。4、操作（试管法）4.1取被检者血清（血浆）各1滴分别加于2支标记好的小试管中；4.2分别各加A1、B试剂红细胞；4.3混匀后离心，1000rmp离心1分钟或者3400rmp离心15秒；4.4先观察是否溶血（溶血或是阳性结果，或是细菌污染），再轻轻摇晃，使红细胞再悬浮起来；4.5观察是否有凝块，记录结果。如可疑可借助显微镜观察凝集情况。5、结果判断正定型反定

5、型血型抗A试剂抗B试剂A1细胞B细胞+——+A—++—B——++O++——AB6、方法的局限性反定型试验必须与正定型一起进行，正反定型不一致必须做进一步研究。单独的反定型结果不能作为判断血型的依据。RHD(IgM)血型定型操作规程1、原理应用红细胞凝集试验检测红细胞抗原。RH（D）血型是由红细胞表面存在或缺失D抗原确定。RH血型用临床上抗原性最强的D抗原作血型鉴定，凡是带有D抗原者称为RH阳性，不带D抗原者称为RH阴性D抗原与细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应。2、试剂市售成熟RHD(IgM)

6、血型定型试剂。3、样品要求应使用新鲜、非溶血标本，可以是未加抗凝剂的血液标本，或者是用EDTA或枸橼酸抗凝的血液标本。必要时应用等渗盐水加入经过洗涤两遍以上的红细胞悬液。严重脂血、黄疸或微生物污染过的标本可能导致结果判断错误。4、操作4.1试管法4.1.1用等渗盐水配制3~5%的红细胞悬液；4.1.2在相应标记好的试管中分别加1滴试剂和1滴红细胞悬液；4.1.31000rmp离心2分钟或3000rmp离心20秒；4.1.4轻轻震荡，悬浮沉积细胞，观察凝集结果；4.1.5若反应为阴性、弱阳性或可疑，200C孵育

7、15分钟；4.1.61000rmp离心2分钟或3000rmp离心20秒；4.1.7轻轻震荡，悬浮沉积细胞，观察凝集结果；4.1.8出现凝集为阳性，未出现凝集为阴性。4.2纸卡法4.2.1在一块纸卡凹孔中滴1滴试剂；4.2.2加1滴等体积全血，混匀；4.2.3轻摇纸卡，观察凝集结果；4.2.4出现凝集为阳性，未出现凝集为阴性。5、结果判断反应强度凝集4+强反应，单一凝集块，无游离红细胞3+强反应，几个大的凝集块，无游离红细胞2+很多小的凝集块中混有大的凝集块，无游离红细胞1+在游离红细胞背景下有很多小的凝集块±

8、肉眼可观察游离红细胞背景下的小凝集块，显微镜下可观察到很多小的凝集块—均匀分布的红细胞悬液，不能观察到凝集的红细胞如果凝集块轻轻摇动就分散开，则判读为阴性。推荐使用试管法。ABO·RhD血型定型试剂卡标准操作程序1、准备工作微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18～25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。2、检测标本的准备：2、1红细胞悬液的制备：取被检者