壳聚糖载体固定化高效亚油酸异构酶及其酶学特性的研究

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1、壳聚糖载体固定化高效亚油酸异构酶及其酶学特性的研究ZJNSF浙江省自然科学基金申请书(2005版)浙江省自然科学基金申请书浙江省自然科学基金委员会二OO五年制申请书版本号：73089175ZJNSF浙江省自然科学基金申请书(2005版)基本信息申请书版本号：73089175ZJNSF浙江省自然科学基金申请书(2005版)项目组主要成员说明：1.个人介绍部分申请者必须填写，其他人员可以不填写；2.高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生及参加单位数由申请者负责填报，总人数自动生成；3.第一人必须是申请者，信息从前面自动读入，但每年工作时间必须手工录入。申请书版本号：7308

2、9175ZJNSF浙江省自然科学基金申请书（2005版）个人介绍：申请书版本号：73089175ZJNSF浙江省自然科学基金申请书（2005版）申请书版本号：73089175ZJNSF浙江省自然科学基金申请书（2005版）申请经费预算6.0万元注：开支范围和标准参见《浙江省省级科技项目经费管理暂行办法》（浙财教字[2002]20号）。申请书版本号：73089175ZJNSF浙江省自然科学基金申请书（2005版）申请者承诺：我保证：（1）申请书内容是真实的；（2）恪守科学道德，伦理道德的基本原则；（3）项目组成员知晓申请书内容，并自愿参与研究工作；（4）已如实填报申请者正在

3、主持的国家和省部资助经费在20万元及以上的研究项目名称、来源和研究期限；（5）如果获得资助，我将履行项目负责人职责，严格遵守浙江省自然科学基金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，认真开展工作，按时报送有关材料。若填报失实或违反规定，本人将承担全部责任。签字：日期：项目依托单位承诺:已按规定对申请人的资格和申请书内容进行了审核。申请项目如获资助，我单位保证对计划实施所需要的人力、物力和工作时间等条件给予保障，严格遵守浙江省自然科学基金委员会有关规定，督促项目组遵守科学道德和伦理道德的基本原则，督促项目负责人和本单位项目管理部门按照规定及时报送有关材料。依托单位公章日期.

4、申请书版本号：73089175ZJNSF浙江省自然科学基金申请书（2005版）1.课题研究意义共轭亚油酸（conjugatedlinoleicacid，CLA）是亚油酸（linoleicacid，LA）位置和几何异构体，是一组不饱和键位置（c8,c10;c9,c11;c10,c12;c11,c13）和几何（cis,cis;cis,trans;trans,cis;trans,trans）异构体的18碳共轭二烯脂肪酸的统称[1]。1986年首次发现CLA可抑制皮肤癌[2]，随后又发现其许多重要生理作用：抗癌；抗氧化；降低胆固醇；促生长因子；抑制脂肪积累；防治糖尿病；抗粥状动脉

5、硬化；改善骨组织代谢；提高饲料效价；防霉等[3，4]。目前，人体必需脂肪酸CLA在医药保健、食品、饲料等方面的应用潜力受到越来越多的关注[5]。上海大学正在进行一项“CLA作为国家二类新药的研究”的课题研究。世界上CLA的工业化生产现在均采用化学法。常用的为碱性异构化方法[6-7]：把含LA的原料溶解于有机溶剂中，在氮气保护、加热及强碱存在下使LA异构化为CLA。此法优点是工艺较简单，转化率可达80%以上；缺点是得到一系列具有位置和几何异构的CLA混合物，还存在着环化等副反应，并且产生大量的废水和废气，对环境的压力很大，难以持续发展。自然界中许多生物具有转化不饱和脂肪酸的

6、能力，国内外已有多家科研教学机构竞相开展此方面的研究[8-9]，其中嗜酸乳杆菌（Lactobacillusacidophilus）具有较高的将LA转化为CLA的异构化酶的生物活性，该LA异构酶为胞内酶[10]。目前该原始菌株发酵液中CLA生成量最高为300μg〃ml-1，即CLA最高含量约为0.03%（w/w）[11]。迄今，对嗜酸乳杆菌的生物转化的作用机制及提高CLA产量的影响因素缺乏系统研究，难以指导生产和从本质上提高CLA的生产能力。微生物发酵法生产CLA，在发酵液中CLA含量太低，且要用大量的有机溶剂将CLA从水溶性的发酵液萃取出来，再经过分离、提纯等许多下游工序

7、，生产成本高，对环境的压力很大。本课题针对上述特点，将嗜酸乳杆菌菌丝中的CLA高效异构酶分离、纯化，用无毒、堆积密度小、比表面大的壳聚糖(由虾壳/蚕蛹皮制得)作为载体将该酶固定化后，在无溶剂体系中直接将LA转化为CLA。本研究的目标为酶法清洁化生产富含CLA的植物油。含70-85%CLA的葵花籽油胶囊美国市场价为每盒15.50美元(规格:30粒/盒;每粒含CLA600毫克)；在欧洲市场，其同样规格的CLA产品价格为13-16欧元。本课题成果具有能将植物油增值几百倍的潜力。21世纪的浙江省生物医药产业将伴随知识经济的崛起而成为令