基因rna干扰载体 对烟草的转化及鉴定

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1、编号：毕业论文（设计）题目：CUC3基因RNA干扰载体对烟草的转化及鉴定院（系）化学与环境工程学院专业生物工程学生姓名xxx成绩指导教师xxx（职称）教授指导教师xxx（职称）研究员2008年6月诚信声明本人郑重声明：所呈交的毕业设计（论文）是我个人在导师指导下,由我本人独立完成。有关观点、方法、数据和文献等的引用已在文中指出,并与参考文献相对应。据我查证，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表和撰写的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。我承诺，论文中的所有内

2、容均真实、可信。如在文中涉及到抄袭或剽窃行为，本人愿承担由此而造成的一切后果及责任。毕业论文（设计）作者签名：签名日期：年月日摘要采用叶盘法通过已导入了构建好的表达载体的根癌农杆菌，对野生型烟草叶片进行转化。烟草叶片在分化培养基MS+0.1mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+50mg/LHyg+500mg/LCb上4周后分化出芽；在生根培养基MS+0.2mg/LIBA+250mg/LCb上，1-2周后形成根；叶片β-葡萄糖甘酸酶（GUS）组织化学染色，阳性率为75%；通过PCR检测潮霉素磷酸转移酶（HPT）

3、基因的DNA序列，获得14个阳性株系。在烟草转化阳性株系中获得了2种表型：叶片融合和叶片缺失。关键词∶根癌农杆菌；GUS组织化学染色;聚合酶链式反应(PCR)AbstractAgrobacteriumwithexpressionvectortransformedtheleavesofNicotianatabacum.Regeneratedshootswereformedin4weekswhentheleavesofN.tabacumculturedonshoot-inducingmediumMSmediumsu

4、pplementedwith0.1mg/LNAA,1.0mg/L6-BA,50mg/LHygand500mg/LCb.ShootsrootedontherootinductionmediumMSmediumsupplementedwith0.2mg/LIBAand250mg/LCbin1-2weeks.β-glucuronidase(GUS)histochemicalassayindicatedthattheGUSpositiveratewas75%.PCRanalysisofgeneHygromycinpho

5、sphotransferase(HPT)geneindicatedthattherewere14positivelines.Therewere2distinctphenotypesinthepositivelines:leaffusionandleafincompleteness.Keywords：Agrobacteriumtumefacien;GUSstaining;polymerasechainreaction(PCR)目录第一章前言11.1烟草概述11.1.1烟草的生物学研究11.1.2烟草的遗传转化研究

6、进展11.2根癌农杆菌转化体系21.2.1根癌农杆菌介导的分子机制31.2.2用根癌农杆菌进行基因转化的植物31.3RNA干扰41.3.1RNA干扰的定义41.3.2siRNA基因沉默原理41.3.3RNA干扰在植物中的应用41.3.4CUC3（Cup-ShapedCotyledon3）基因61.4常用分子生物学实验方法61.4.1GUS基因检测——组织化学染色法61.4.2基因组DNA提取（CTAB法）71.4.4PCR技术81.4.4琼脂糖凝胶电泳81.5立题的依据及目的101.6本研究的目的及实验内容11

7、第二章材料与方法122.1材料122.1.1植物材料122.1.2菌株122.1.3培养基122.1.4试剂132.1.5实验仪器142.2方法162.2.1烟草无菌苗的培养162.2.2菌株及培养162.2.3叶盘法浸泡转化及植株再生172.2.4烟草转基因植株鉴定17第三章结果与讨论203.1实验结果203.1.1转化植株的获得203.1.2GUS组织化学染色法鉴定213.1.3PCR扩增检测阳性转基因植株223.2转基因植株的表型特征分析223.2.1表型类型Ⅰ——叶片融合223.2.2表型类型Ⅲ——叶片

8、缺失233.3讨论243.3.1分化和筛选培养基的选择243.3.2报告基因的选择243.3.3表型分析25第四章结论与展望264.1结论264.2展望26致谢27附录31第一章前言1.1烟草概述烟草在植物分类学上属于双子叶植物纲(Dicotyledoneae)、管花目(Tubiflorae)、茄科(Solanacene)，烟属(Nicotinan)，是许多国家的重要经济作物之一。目前