基因治疗（6）ppt课件

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1、危敏副教授南方医科大学基因工程研究所基因治疗药物治疗手术治疗放射治疗理疗传统治疗方法新的生物治疗：基因治疗(genetherapy)基因治疗一、概念二、策略三、基本流程四、应用与展望一、基因治疗的概念Genetherapyisamedicalinterventionbasedonmodificationofgeneticmaterialsinlivingcells.基因治疗是指改变细胞遗传物质为基础的生物医学治疗。概念的发展经典概念：将具有正常功能的基因置换或增补患者体内的缺陷基因，从而达到治疗疾病的目的。广义概念：将某种遗传物质转移至患者细胞内，使其在体内有效表达，最终达到治疗疾病目的

2、的方法，均称之为基因治疗。二、基因治疗的策略(一)直接策略：针对致病基因(二)间接策略：导入与致病基因无直接联系的治疗基因(一)直接策略基因矫正（genecorrection）基因置换（genereplacement）基因增补（geneaugmentation）又称为补偿性基因治疗4.基因干预（geneinterference）又称为反义基因治疗基因矫正（genecorrection）指将致病基因的突变碱基加以纠正，而保留正常部分。基因置换（genereplacement）指通过同源重组（基因打靶）技术，将正常基因定点整合到靶细胞基因组内，以原位替换致病基因。不涉及基因组整体改变的情况下

3、对缺陷基因进行精确的原位修复，是最理想的治疗方式。基因打靶技术指目的基因导入靶细胞后，通过目的基因与靶细胞内染色体上同源DNA序列间的交换，将目的基因定点整合到靶细胞基因组上某一确定位点的技术。3.基因增补（geneaugmentation）成熟的策略是指不去除异常基因，将有功能的正常基因导入病变细胞或其它细胞后发生非定点整合，表达正常产物以补偿缺陷基因的功能，或使原有的功能得以加强。4.基因干预（geneinterference）是采用特定的方法，导入外源基因选择性地阻断、干扰、抑制和封闭有害基因在DNA、RNA和蛋白质水平的表达及其生物合成。导入抑癌基因反义核酸技术(antisens

4、etechnology)：①反义RNA；②反基因技术；③核酶RNA干扰（RNAinterference)抑癌基因疗法抑癌基因：是正常细胞内正常存在的，能抑制细胞转化和肿瘤发生的一类基因群。Rb基因，p53基因，MTS基因，nm23基因p53基因治疗研究：（1）野生型p53基因的替代疗法（2）突变型p53基因的阻断疗法（3）与p53基因有关的新型肿瘤疫苗反义核酸反义RNA（antisenseRNA）：与mRNA互补的RNA，抑制mRNA的加工与翻译。核酶（ribozyme）：具有催化功能的RNA，其与相应mRNA结合后能发挥酶活性，将mRNA降解。反义脱氧寡核苷酸，ODN反义RNA技术体外

5、合成反义RNA，直接导入；将特异的反义基因通过特定的表达载体（质粒、病毒）导入细胞，转录出反义RNA发挥作用，避免了在给药途径中易被RNase降解的缺点。关键性问题1.专一性转移如何专一的作用于病变细胞，而不影响其他正常细胞。2.反义RNA进入靶细胞前的降解问题解决：特定受体介导的反义RNA转移受体介导的反义RNA转移脱唾液酸糖蛋白（ASGP）受体介导的转移，通过化学物质作为中间连接物，将ASGP与多聚赖氨酸（PL）共价结合，得到ASGP-PL复合物，这种复合物可以携带RNA，再专一性地被肝细胞表面的ASGP受体所识别，并被吞噬到肝细胞内发挥作用。反义RNA应用前景1.安全性高不改变基因

6、结构，最终在细胞内被降解。2.设计和制备方便体外转录获得。3.具有剂量调节效应4.能直接作用于一些RNA病毒反基因技术脱氧寡核苷酸（oligodeoxyribonucleotide,ODN），也被称为TFO(triplehelix-formingoligo)通过TFO在DNA结合蛋白的识别位点处，与靶基因结合形成三螺旋，从而位点专一性地干扰DNA与反式作用因子的结合，抑制转录起始或转录延伸，达到“反基因”的目的。DNA水平阻止基因转录肽核酸（peptidenucleicacids，PNA，一种以多肽骨架取代糖-磷酸骨架的DNA类似物）核酶催化RNA切割和RNA剪接Recognitions

7、equences“hammerhead”ribozymes1981年，Cetch和Alfman首次发现了一类具有特异性剪切RNA活性的RNA分子。核酶具有稳定的空间结构，不易受到RNA酶的攻击。核酶在切断mRNA后，又可从杂交链上解脱下来，重新结合并切割其他的mRNA，效率高于反义RNA。核酶的特点RNA干扰技术概念：短的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使同源mRNA发生特异性的降解，从而阻断相应基因的表达。高度的序列专一性高