凡纳滨对虾肾素—血管紧张素系统与盐度应激关系的研究

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1、2018届研究生硕士学位论文分类号：学校代码：10269密级：学号：51151300086硕士学位论文论文题目：凡纳滨对虾肾素-血管紧张素系统与盐度应激关系的研究院系：生命科学学院专业：动物学研究方向：水生动物生理学指导教师：李二超教授禹娜教授学位申请人：刘艳2018年5月15日Masterdegreethesisin2018UniversityCode:10269StudentID:51151300086EastChinaNormalUniversityMaster’DissertationTitl

2、e:Studyontherelationshipbetweenrenin-angiotensinsystemandsalinitystressinPacificwhiteshrimpLitopenaeusvannameiDepartment:SchoolofLifeSciencesMajor:ZoologyResearchdirection:PhysiologyofAquaticAnimalsSupervisor:Prof.ErchaoLi&Prof.NaYuCandidate:YanLiuMay20

3、18密”审批表》方为有效），未经上述部门审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写的，默认为公开学位论文，均适用上述授权）。刘艳硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名职称单位备注冷向军教授上海海洋大学主席陈立侨教授华东师范大学委员王群教授华东师范大学委员乔芳工程师华东师范大学秘书摘要凡纳滨对虾（旧称南美白对虾，Litopenaeusvannamei）是一种广盐性的海水养殖品种，生长快、存活率高、抗逆性强，广受水产养殖业的青睐，是全球三大养殖对虾之一。随着其养殖产量的逐年升高，加之不科学的管理方式，海水

4、养殖环境越来越差。因此越来越多的人用淡水养殖凡纳滨对虾，但是低盐度条件下凡纳滨对虾会出现一系列的应激反应，导致对虾免疫力下降，阻碍生长等。为了解决这一难题，研究人员开展了大量有关低盐度胁迫与凡纳滨对虾应激关系的研究，但是对内分泌与盐度应激的研究却很有限。因此本文以凡纳滨对虾为研究对象，从转录组、mRNA和蛋白水平三方面入手来探讨其肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensinsystem，RAS）与盐度的应激关系，以期为低盐度胁迫对甲壳类及其他水生动物内分泌影响的研究提供一定的参考。1.长期

5、低盐度胁迫下凡纳滨对虾眼柄的转录组学分析凡纳滨对虾眼柄中的X器官-窦腺复合体为机体内分泌的控制中心，所以本章采用Illumina高通量测序技术，分析了长期低盐度（3psu）胁迫对凡纳滨对虾眼柄内基因表达的影响（25psu为对照组），以探究凡纳滨对虾内分泌与盐度应激的关系。DenovoRNA测序共筛选出6.17×107reads,总长度为8.98×1010bp。利用Trinity软件对结果进行拼接、比对后，得到17,222条Unigene,总长度为1.88×107bp。通过功能注释及KEGG富集分析，得

6、到差异表达基因的个数为479（foldchange>2,Pvalue<0.05），其中上调基因150个，下调基因329个。有10个与内分泌调控相关的基因发生了显著的变化，其中肾素-血管紧张素系统的变化最为显著（P=0.016）,此系统中的血管紧张素转换酶（ACE）和氨肽酶N（AP-N）均出现显著下调。随后，随机从显著变化的基因中选择20个进行实时荧光定量PCR验证，结果进一步证明了转录组数据的正确性和可靠性（R=0.97）。本研究表明，凡纳滨对虾体内的I肾素-血管紧张素系统在适应长期盐度胁迫过程中发挥

7、了重要的作用，是凡纳滨对虾渗透压调节的重要环节。本研究不仅能为探究凡纳滨对虾渗透压调节提供新的思路，也能为甲壳动物内分泌系统的研究提供一定的参考。2.凡纳滨对虾肾素-血管紧张素系统中关键基因的克隆与分析血管紧张素转换酶（ACE）、氨肽酶N（AP-N）、血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1R）和肾素受体（RR）在RAS通路中发挥很重要的作用，因此本研究对这四个基因进行了片段克隆及生物信息学分析。最终得到四个基因分别对应2326bp、3100bp、593bp、1116bp核苷酸序列。其中ACE的分子质量为79k

8、Da，等电点为6.0，脂肪族指数为77.65，有信号肽，有48个磷酸化位点，无跨膜结构域，O-糖基化位点为5个，N-糖基化位点为4个。AP-N的分子质量为104kDa，等电点为6.13，脂肪族指数为85.32，有信号肽，有102个磷酸化位点，无跨膜结构域，O-糖基化位点为9个，N-糖基化位点为10个。AT1R的分子质量为19kDa，等电点为4.73，脂肪族指数为90.29，无信号肽，有19个磷酸化位点，有2个跨膜结构域，O-糖基化位点为1个，N-糖基化位