毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用.doc

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1、毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用【摘要】目的探讨毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用。方法用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠，建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型，采用ELISA方法测定肺组织悬液中的IL-4和IFN-γ的活性水平，观察毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用。结果毒热平注射液各剂量组小鼠肺匀浆的IFN-γ活性水平明显升高而IL-4的活性显著下降；毒热平注射液的0.33g/(kg·d)和0.17g/(kg·d)剂量组对流感病毒感染小鼠具明显的保护作用。结论毒热平注射液能通过调节细胞因子的活性，纠正Th1/Th2细胞失衡而发挥抗流感病毒作用。

2、【关键词】毒热平；流感病毒；Th1/Th2；细胞漂移　Abstract:ObjectiveToexploretheantiviruseffectofDurepingInjectioninmice.MethodsThemurinepneumoniamodelwasestablishbyinfluenzavirusstrainA/FM/1/47(H1N1).Thebioactivityofinterleuking-4(IL-4)andinterferon-γ(IFN-γ)inthemurinelungwasdetectedbyELISA.ThemurineDeathRatewasobserved.

3、ResultsDurepingInjectiondecreasedthebioactivityofIL-4andincreasedthebioactivityofIFN-γ.Itshowed0.33g/（kg·d）and0.17g/（kg·d）ofDurepingInjectionhadsignificantlyprotectiveeffecttodeathofthemousewithviruspneumonia.ConclusionDurepingInjectionhasanobviouseffectagainstinfluenzavirusFM1strainbycorrectingtheT

4、h1/Th2cellshift,regulatingthebioactivitiesofTh1cytokinesandthebioactiviesofTh2cytokines,whichreachanewbalancebetweenTh1cellandTh2cell.　　Keywords:Dureping；influenzavirus；Th1/Th2；celldrift流感是一种具有高度传染性的急性呼吸道疾病，遍布全世界，引起人和动物很高的发病率和病死率［1］。研究证明，中药在抗流感病毒方面有其独特的优越性，其一方面直接抑制和灭活流感病毒；另一方面，调节机体免疫网络，起到抗流感病毒免疫的作用。

5、本研究探讨毒热平注射液对流感病毒感染小鼠Th1/Th2细胞漂移的影响，为该药的临床应用提供实验室研究数据。　　1实验材料　　1.1病毒流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)，中国中医药研究院中医所提供，本实验室76℃保存备用。于9日龄鸡胚尿囊腔连续传代2次后，测血凝滴度为1∶512。4　　1.2动物ICR小鼠，体重(14±1)ɡ，合格证号：SLXK(京2005-2006)，级别：SPF/VAF。小鼠及饲料均由北京维通利华实验中心提供。饲养环境：本室动物室动物洁净柜，室温：(22±2)℃，相对湿度：50%±10%。　　1.3药物　　毒热平注射液，棕色液体，17.4mg/mL，由广东省康美药业有限公司

6、开发提供；阳性对照药：注射用双黄连(冻干粉)：600mg干粉/支，实验前用无血清DMEM培养液配制成40mg/mL备用，批号：0501004(哈药集团中药二厂)；利巴韦林：100mg/mL，批号：0506251(石药集团欧意药业有限公司)。　　1.4细胞因子检测试剂盒：购自美国Biosource公司。　　2方法和结果　　2.1流感病毒对小鼠半数致死量(LD50)的测定取ICR小鼠50只，用单纯随机抽样法随机平均分成5组，病毒为2-6～2-105个稀释度，每只小鼠经乙醚轻度麻醉后分别滴鼻感染不同稀释度病毒液0.05mL，以死亡和生存为观察指标，24h内死亡的不予统计。每天观察，直至感染后第14天

7、为止。按Reed-Munch公式［2］计算出病毒的半数致死量(LD50)为10-2.2。　　2.2对流感病毒所致小鼠死亡的保护作用取ICR小鼠144只，随机分组、给药见表1。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉，正常对照组以生理盐水0.05mL滴鼻，其余各组以4LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05mL，于感染当天开始腹腔给药，正常对照组在同等条件下注射生理盐水，每天1次，连续10d。从感染之日算起，每天观