幽门螺杆菌感染及环氧合酶2表达与胃癌变的关系.doc

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1、幽门螺杆菌感染及环氧合酶2表达与胃癌变的关系【摘要】目的：探讨胃黏膜幽门螺杆菌(helicobactorpylori,H.pylori)感染、环氧合酶2(COX2)的表达与胃癌发生、发展的关系.方法：胃癌(GC)标本80例，非典型增生(Dys)40例，萎缩性胃炎(CAG)30例，肠上皮化生(IM)30例，浅表性胃炎(CSG)30例，应用免疫组化方法测定COX2蛋白的表达，用亚甲兰染色检测H.pylori.结果：CSG，GC中H.pylori阳性和阴性病例COX2表达差异无统计学意义(P>0.05),但在CAG，IM，Dys中的H.pylori阳性病例

2、中COX2表达高于H.pylori阴性病例（52.9%vs7.6%，52.6%vs9.0%，67.9%vs33.3%）.结论：H.pylori感染诱导COX2表达发生在胃癌形成的早期阶段.【关键词】胃肿瘤癌前状态螺杆菌幽门前列腺素内过氧化物合酶0引言胃癌的发生是一个多阶段、多因素的复杂发展过程.至今，病因还没有完全研究清楚，但近年的大量研究证实，H.pylori感染是胃癌病因中最重要的环境因素之一，H.pylori感染诱导一个复杂免疫反应，首先炎细胞聚集，然后导致增生，细胞因子释放，最终导致分子改变.在被H.pylori上调的靶基因中，COX2在胃癌进程中起重

3、要作用，因此，COX2与肿瘤的关系倍受关注，COX2是一种诱导型酶,其与肿瘤的发生、发展有密切关系,并且可作为预防、治疗肿瘤的靶分子,对其检测具有重要的临床意义.H.pylori感染及其诱导的COX2表达在胃黏膜病变转变过程中的相关性尚不清楚.我们检测chronicsuperficialgastritis,chronicatrophicgastritis,intestinalmetaphasia,dysplasia和gastriccarcinoma标本中的H.pylori感染和COX2蛋白的表达，探讨H.pylori感染及其诱导的COX2在不同胃黏膜病变中

4、的表达情况，探讨其表达与胃癌发生、发展的关系，为胃癌的早期诊断及治疗提供依据.1对象和方法1.1对象200501/200612病理确诊存档组织蜡块，术前未放、化疗，年龄28~90（中位58）岁.男125例，女85例.其中GC标本80例，CSG30例，CAG30例，IM30例，Dys40例.常规制备4μm连续切片4张，兔抗人COX2多克隆抗体、免疫组化SABC试剂盒及DAB显色试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司.亚甲兰溶液配制：亚甲兰11g，硼酸1g加蒸馏水100mL.1.2方法免疫组织化学染色采用SABC法：新鲜配置H2O2孵育；微波修复抗原；滴加BSA

5、封闭液，室温30min.甩去多余液体，不洗；每张切片加1滴或50μL第一抗体，4℃孵育过夜；滴加二抗，37℃下孵育20min，PBS冲洗，5min×3次；滴加试剂SABC，37℃下孵育20min;PBS冲洗，5min×3次；DAB显色：每张切片加2滴或100μL新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察5~10min;4蒸馏水冲洗；自来水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化，中性树胶封片.COX2阳性染色主要位于细胞胞质中,呈棕黄色弥漫性分布，间质细胞(炎性细胞、内皮细胞及成纤维细胞)和平滑肌细胞中亦可见散在部分表达，通过光学显微镜每张切片摄取5个高倍视野，计数阳性细胞个数，计

6、算阳性细胞率，以≤5%为0分,6%~25%为1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,76%~100%为4分，着色强度0分为阴性,1分为浅棕黄色（弱阳性）,2分为棕黄色（阳性）,3分为深棕黄色（强阳性）.每张切片的染色积分以这两者的乘积表示.另HP染色：石蜡切片61℃烤片40min，脱蜡，梯度水化.亚甲兰溶液中染色1min.水洗凉干后用中性树胶封固.H.pylori在400倍高倍镜下观察，以切片中腺腔内找到深兰色单个或多个聚集的短棒状、弧状、“S”状杆菌为阳性（+），否则为阴性.统计学处理：组间率的比较采用χ2检验或精确概率法，P<0.05为差异有统计

7、学意义.2结果2.1胃黏膜感染率在CSG，CAG，IM，Dys，GC中H.pylori感染率分别为23.3%(7/30),56.7%(17/30),63.3%(19/30),70%(28/40),35%(28/80).CAG，IM，Dys的H.pylori感染率与CSG相比差异有统计学意义（χ2=6.94,χ2=6.71,χ2=10.60,P<0.01）.GC的H.pylori感染率与CSG相比差异无统计学意义（χ2=1.37,P>0.05）.2.2胃黏膜COX2的表达率COX2在CSG，CAG，IM，DYS，GC中的阳性表达率分别为10%（3/