抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑制作用及VEGF表达的影响.doc

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1、抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑制作用及VEGF表达的影响作者：吴敏华，周维顺，谢长生【摘要】：［目的］观察抗肺癌合剂对C57BL/6小鼠Lewis肺癌的抑制作用，并从分子水平观察其对肿瘤组织VEGF表达的影响。［方法］C57BL/6近交系小鼠50只，造模后，抗肺癌合剂（低、中、高3个剂量）、生理盐水、CTX分别作用于动物模型。15d后处死所有动物，剥取瘤组织称重，并计算抑瘤率；应用免疫组化法及图像分析技术检测瘤组织VEGF表达的积分光密度。［结果］在平均瘤重上，中药高剂量组与模型组有显著性差异（P<0.05）；在肿

2、瘤组织VEGF表达上，中药高剂量组与模型组有显著性差异（P<0.05）。［结论］抗肺癌合剂能抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长，并能降低Lewis肺癌小鼠肿瘤组织VEGF表达。【关键词】肺肿瘤；血管内皮生长因子；中医药治疗　　Abstract：［Objective］TostudytheeffectonthegrowthofmouseLewislungcarcinomaandontheexpressionofVEGFintumortissue.［Methods］C57BL/6micewereinoculatedtheLe

3、wislungcarcinomacellatrightarmpitanddividedintogroups.DifferentgroupswereadministeredbyMAALC(low,normalandhighdose),CTXorsaline.After15days,allmicewereputtodeathtodetachthetumorsthenweighedthem.Afterthat,wetreatedtumortissuewithVEGFimmunohistochemistrystain,detec

4、tedtheintegralopticaldensityofVEGFexpressionwithimageanalyticaltechnique.［Results］Comparedwithmodelgroup,theaverageweightandVEGFexpressionlevelofthetumorsofthehighdosegroupwerelessandstatisticallysignificant(P<0.05).［Conclusion］MAALCcanrestrainthegrowthofLewis

5、lungcarcinoma，andcandegradetheexpressionlevelofVEGFintumortissue.　　Keywords:lungneoplasms;VEGF;TCMtherapy肺癌是目前最常见的恶性肿瘤，近年其发病与死亡呈明显上升趋势，严重危害人民健康，对其防治任重道远。诸多研究表明，中医药在抗肿瘤生长与转移，对放化疗的增效减毒，提高机体免疫功能，改善症状、提高生存质量上有其自身的优势。抗肺癌合剂是周维顺教授通过长期临床实践创立的经验方，主要用于肺癌病人，并在临床使用中取得了较好的疗效，

6、为进一步验证其效果，并初步探讨其可能的作用机制，本研究从动物实验角度,观察抗肺癌合剂对C57BL/6小鼠Lewis肺癌的抑制作用，并从分子水平观察其对肿瘤组织VEGF表达的影响。　　1材料与方法4　　1.1实验动物　　六周龄C57BL/6近交系小鼠50只，雌雄各半，体重（17.02±1.81）g，清洁级，均由浙江中医药大学实验动物中心代购。Lewis肺癌瘤源小鼠由浙江省中医药研究院馈赠。　　1.2实验药物和试剂　　抗肺癌合剂（白花蛇舌草、半枝莲、猫人参、猫爪草、野荞麦根、生黄芪、北沙参等16味中药组成）水提取至高剂量组浓

7、度为每毫升含生药3g，4℃冰箱保存备用。中剂量、低剂量组临用时由高剂量组用蒸馏水稀释至浓度为每毫升分别含生药1.5g和0.75g。注射用环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司，200mg/支，批号：05081821）用时以生理盐水临时配制成浓度为2mg/ml。小鼠抗鼠VEGF单克隆抗体、PV6001/6002PowerVisionTMTwoStep免疫组化染色试剂盒、ZLI9032浓缩型DAB试剂盒（购自北京中杉金桥生物技术有限公司）。　　1.3实验造模　　参照文献［1］造模，将接种Lewis肺癌的瘤源小鼠脱颈椎处死，

8、消毒后置于超净台上，剪开小鼠腋下皮肤，取新鲜肿瘤组织并剪成约1mm3碎块，置于匀浆器中研磨，并以200目滤膜过滤到无菌烧杯内，加生理盐水稀释成1:3的瘤细胞悬液。用移液枪吸取细胞悬液约20μl置于无菌试管内，用生理盐水稀释100倍，加0.2%台盼兰染色后，吸取少许置于细胞计数板上，放于低倍显微镜下观察，计算活细胞数。