病毒感染的检查和防治医学ppt

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1、病毒学诊断一、标本的采集与送检基本原则与细菌的相似，但还要特别注意：对本身带有杂菌或易受污染的标本，分离培养时应使用抗生素。低温保存并尽快送检，因病毒在室温易失去活性。血清学诊断标本应采集发病初期和病后2~3w内各一份血清，观察其抗体的动态变化。二、病毒的分离与鉴定（金标准）㈠病毒的分离1.动物接种2.鸡胚培养：按病毒种类接种不同部位绒毛尿囊膜—天花病毒、痘苗病毒、HSV等尿囊腔—流感病毒、腮腺炎病毒等羊膜腔—流感病毒的初次培养卵黄囊—某些嗜神经病毒3.细胞培养：病毒分离鉴定中最常用的方法。按其生长方式分为单层培养和悬浮细胞培养按来

2、源、染色体特征及传代次数等分为原代细胞、二倍体细胞和传代细胞系病毒在培养细胞中增殖的指标1.细胞的变化细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE）：有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变。①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等；②邻近的细胞相互融合形成巨细胞(融合细胞)如：麻疹病毒、巨细胞病毒；③在培养细胞中形成胞质或核内包涵体，如狂犬病病毒、麻疹病毒2.红细胞吸附(hemadsorption,HAd)具有血凝素的病毒（流感病毒等），使受染细胞膜含有病毒血凝素抗原成分，能与红细胞结合出现红细胞吸附现象，以检测是否有病毒

3、在细胞内增殖。3.干扰现象(interference)某些病毒感染细胞时不出现CPE、Had等变化，但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。4.细胞代谢的改变培养液的PH改变㈡病毒的数量与感染性测定常用的方法：蚀斑测定法和50%组织细胞感染量（ID50或TCID50）①空斑形成单位（PFU）：可测定病毒数量，空斑（P1aque）是病毒在单层细胞中增殖并扩散而形成的不易着色的病灶区。一般是由一个感染性病毒体大量复制形成，类似细菌的菌落，称为空斑形成单位。病毒悬液中感染性病毒量以每毫升中的空斑形成单位数来表示。②

4、50％组织细胞感染量（TCID50）是病毒毒力测定的方法，应用不同稀释度的病毒悬液接种动物、鸡胚或细胞培养，引起50％发生病变或死亡的最小病毒量。可以估计病毒感染的强弱程度及含量。㈢新分离病毒的鉴定病毒核酸类型的测定DNA病毒和RNA病毒理化形状的测定包括病毒颗粒大小及结构、衣壳对称类型、有无包膜等形态学观察通过电镜和免疫电镜检查血清学鉴定病毒型别的最后鉴定须靠血清学方法基因测序和生化对比三、病毒感染的血清学诊断中和试验(neutralizingtest)病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验，可用来检查患者

5、血清中抗体的消长情况，也可用来鉴定未知病毒或研究病毒的抗原结构。适用于人群免疫情况的调查。补体结合试验(comolementfixationtest,CFtest)用已知病毒可溶性补体抗原来检测病人血清中相应的补体抗体。血凝抑制试验(hemagglutinatiainhibitiontest,HItest)相应的抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面的HA与红细胞的结合。常用于粘病毒及乙型脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，也可鉴定病毒的型与亚型。凝胶免疫扩散试验主要用于诊断HBV与乙型脑炎病毒等感染。四、病毒感染的快速诊断㈠形态学检查

6、1.电镜和免疫电镜检查2.普通光学显微镜检查㈡病毒蛋白抗原检查1.免疫荧光法(IF)2.固相放射免疫测定（SPRIA）3.酶免疫测定（EIA）㈢特异性IgM抗体的检测㈣检测病毒核酸1.核酸杂交技术斑点杂交、DNA印迹技术2.核酸扩增技术⑴聚合酶链反应(polymerasechainreation,PCR)⑵连接酶链反应(ligasechainreation,LCR)⑶反转录PCR(RT-PCR)3.基因芯片技术(genechip)特异性预防与治疗特异性防治是应用获得性免疫的原理，给机体注射或服用病原微生物抗原（包括类毒素）或特异性抗

7、体以达到预防和治疗的目的。这种方法称为人工免疫(artificalimmunization)。人工免疫分为人工主动免疫和人工被动免疫。人工主动免疫(artificalactiveimmunization)：将疫苗及类毒素（抗原）接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力。主要用于预防。人工被动免疫(artificalpassiveimmunization)：输入含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫力的过程一、人工主动免疫㈠疫苗1.死疫苗(killedvaccine)用物理或化学方法将

8、其杀死病原微生物，但仍保持其抗原性的一种生物制剂。如霍乱、百日咳、伤寒、钩端螺旋体疫苗等。2.活疫苗(livingvaccine)通过毒力变异或人工选择发而获得的减毒或无毒株，或从自然界筛选得到的毒力弱毒或无毒株经培养后制成的疫苗亦称