细胞培养及培养细胞的生物学特点ppt课件

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1、细胞工程的研究范畴细胞与组织培养细胞融合细胞核移植染色体工程胚胎工程干细胞与组织工程转基因生物与生物反应器第二章细胞培养及培养细胞的生物学特点第一节组织培养(tissueculture)组织培养（tissueculture）习惯上泛指所有的体外培养，即器官培养、组织培养和细胞培养的总称。其本意是指从活的机体中取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、适温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术称为组织培养。组织培养这一名词实际上是一个通用名词，其实际内容根据培养物的不同可概括为三个不同概念：一、组织培养的基本概念组织培养：将活体的一小片

2、组织放在盛有培养液的玻璃或塑料培养器皿中，待组织块粘着后，沿底面平面移动生长的过程称为组织培养。从组织块中生长出来的仍然是细胞，细胞在生长的同时也发生移动，至使组织中的培养难以长时间维持其原有结构，结果也就成了细胞培养。细胞培养：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。器官培养：所谓器官培养，是指采取某些措施使器官的原基、器官的一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的培养技术称为器官培养。体外培养的种类二、细胞培养的优点1.研究的对象是活细胞在实验过

3、程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。2.研究条件可以人为控制可以根据需要，控制包括pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。3.研究的样本可以达到比较均一性通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。4.研究内容便于观察、检测和记录采用各种研究技术、记录方法：研究:倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流

4、式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记记录:摄影照片、缩时电影、电视5.研究的范围比较广泛学科多：病毒学、免疫学、肿瘤学、遗传学、临床医学等对象广：各种动物：低等动物、高等动物、人类一种动物：不同年龄、不同组织、正常或异常（肿瘤）6.研究的费用相对较经济可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。三、细胞培养的缺点1、体外培养的细胞，尤其是反复传代、长期培养者，有可能发生染色体非二倍体改变等情况。2、细胞培养对人员、设备等条件都要求较高。这些都影响细胞培养技术的更广泛应用。3、 动物细胞的培养对营养的要求较高。4、动物细胞培

5、养的另一个突出特点，是对环境条件要求严格。正确认识：现在人工模拟体内环境的技术已经很高,但,人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同，当细胞被置于体外培养后,生活在缺乏动态平衡的环境中,久了，必然发生变化。因此，对于体外培养的细胞，应该把他们视作一种既能保持动物体内原细胞一定的性状、结构和功能又具有某些改变的特定的细胞群体，而不能将之与体内的细胞完全等同。第二节细胞培养的细胞生物学一、体内外细胞的差异及分化（一）体内外细胞的差异1.与体内主要不同相对孤立、相对单一，缺乏体内的系统作用，失去神经体液的调节和细胞相互间的影响。2.主要表现失去原有组织结构和细胞形态

6、分化减弱或不显细胞趋向单一化；3.提示要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。（二）培养细胞的分化1．不适应(Deadaption)：表现为，细胞在原体内时所拥有的分化特性减弱或不显，如肝细胞产生酪氨酸转移酶(TyrosineAminotranserase)特性的丧失.2．脱分化或去分化(Dedifferentiation)细胞也可能出现脱分化或去分化，即细胞失掉发生分化的能力。二、培养细胞形态分类（一）体外细胞培养物的生长类型按生长方式分为两种类型贴附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状

7、态下即可生长的细胞。绝大多数有机体细胞属粘附型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。1、贴附(粘附)型细胞培养特点与体内同名的细胞不完全相同如：形态相似的成纤维细胞，可不同来源。自同一动物不同组织的成纤维样细胞相似但发展趋向不同培养细胞的形态不稳定条件改变，细胞形态可能有变化培养细胞形态不稳定血清Hela高血清低血清成纤维细胞样上皮样细胞pHHela太酸或太碱标准pH成纤维细胞样上皮样细胞细胞密度3T3低密度高密度成纤维细胞样上皮样细胞生长状态改变悬浮或贴附悬浮贴附圆形成纤维或上皮样转化与否未转化转化后成纤维样可成上皮样分类根据形态大致

8、的不同，主