羧甲基壳聚糖的含量测定

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1、药物生物技术PharmaceuticalBiotechnology2008,150):59^63竣甲基壳聚糖的含量测定邹巧根‘,2，韦萍‘’，邹珊，，李著2，欧阳平凯，(1.南京工业大学制药与生命科学学院，江苏南京210009;2.中国药科大学，分析测试中心，江苏南京210009)摘要梭甲基壳聚糖含量的测定通常采用的方法为乙酞丙酮法，但由于市售梭甲基壳聚糖样品中氨基的的脱乙酞化程度和取代度差异，导致用乙酞丙酮法测定市售样品含量时实测值与理论值偏差较大。因此，采用测还原总糖含量的3,5一二硝基水杨酸比色法(DNS法)对梭甲

2、基壳聚糖进行含量测定。经过方法学验证，该方法线性的平均相关系数，=0.9995，以D-盐酸氨基葡萄糖计线性范围在200---1800jig，重复性实验RSD=1.23%，平均回收率为100.060o,RSD=2.45%0，显色后吸收值在2h内稳定。用DNS法对市售梭甲基壳聚糖样品的含量测定结果与理论含量基本相符。因此，该方法更适用于狡甲基壳聚糖的含量测定.关键词梭甲基壳聚糖;含量测定;乙酞丙酮法;3,5一二硝基水杨酸(DNS)中图分类号:0539文献标识码:A文章编号:1005-8915(2008)01-0059-05梭

3、甲基壳聚糖为壳聚糖的梭甲基化产物。壳量测定。聚糖是从虾、蟹等甲壳类海洋生物中提取出的甲壳本文采用乙酞丙酮法和DNS法对市售几种梭素经脱乙酞化得到，结构为户(1,4)-2一乙酞氨基-甲基壳聚糖进行测定，并对DNS法进行方法学D-葡萄糖单元和户(1,4)-2-氨基一D-葡萄糖单元共验证。聚物。由于天然甲壳素和壳聚糖具有刚性骨架和1材料与方法较强的分子间氢键，使其分子具有一种有序的晶型结构，均不溶于水，使得应用受到限制[[1,210梭甲1.1仪器与试剂基壳聚糖由于引人了梭甲基使其水溶性大大增强，仪器:岛津(LIBRORAEU-

4、210)分析天平，岛从而扩大了其应用范围，不仅在制药、生物医用材津UV-2401PC紫外一可见分光光度计，江苏金坛料行业用途广泛，在健康食品，化妆品等行业也有市仪器厂85-1微型漩涡混合仪。大量的研究和开发报道[31。因此其含量测定方法试剂:梭甲基壳聚糖分别购自仙居生物化学制的确定是十分重要的，以便进行质量控制。药厂，青岛海普生物技术有限公司，上海升耀生物技关于梭甲基壳聚糖的含量测定，目前国内外报术有限公司，均为医药级。D-盐酸氨基葡萄糖标准道较少而且缺少专属性测定该多糖含量的成熟方品购自国药集团化学试剂有限公司，批号为

5、法，并且由于没有标准对照品因此无法使用HPLCNMC20060621。乙酸丙酮，结晶酚(苯酚)购自上海方法进行定量分析，故多采用化学分析方法[[3]。凌峰化学试剂有限公司，均为分析纯。3,5一二硝基目前测定多糖的方法有硫酸苯酚法、硫酸葱酮水杨酸，亚硫酸氢钠购自南京化学试剂厂，均为分析法、乙酞丙酮法、硫酸咔哇法、DNS法等。其中硫纯。NaOH购自广东汕头市西陇化工厂，为分析纯。酸苯酚法和硫酸葱酮法适用于总糖含量的测定，硫酒石酸钾钠购自上海光华化学试剂厂，为分析纯。酸咔哇法适用于己糖醛酸，乙酞丙酮法适用于氨基其它试剂均来自于

6、南京化学试剂厂，均为分析纯。糖，DNS法适用于还原糖的测定。由于组成梭甲1.2乙统丙酮法测定菠甲基壳聚糖中单糖含量基壳聚糖的主要单糖结构为竣甲基氨基葡萄糖和1.2.1乙酸丙酮法原理氨基葡萄糖在碱性条件竣甲基乙酸氨基葡萄糖而且均为还原糖，因此从原下加热，乙酞丙酮将氨基葡萄糖分子2号碳位上的理看乙酞丙酮法和DNS法较适合于此种多糖的含氨基乙酞化，生成带有毗咯环的N-乙酞衍生物。该收稿日期:2007-09-10修回日期:2007-10-19作者简介:邹巧根，1963年生，汉族，博士。，通讯作者:韦萍,1961年生，汉族，教授，

7、博导。Tel:025-83587341,E-mail:weiping@njut.edu.cn,万方数据药物生物技术第巧卷第1期衍生物与对二甲氨基苯甲醛反应，反应物呈红色，于10ml，即得样品溶液。525rnn测定吸光度。其适用范围是氨基糖。1.3.2.5显色和测定川精密移取2ml样品溶1.2.2测定方法[33精密称定梭甲基壳聚糖干燥液置10ml具塞试管中，加人lmlDNS试剂，混匀品30rng，置sml安瓶中，加sml6mol/L盐酸，沸水浴中加热显色smin，流动水冷却，加水稀释封口后沸水浴中水解2.sh，冷却，完全转

8、移至烧杯至10ml;以空白为参比，于520nm处测定吸收中，用6mol/LNa0H溶液调节至中性，定容至值。根据标准曲线，通过回归方程计算梭甲基壳聚looml，精密移取sml，加水稀释至25ml，即得样糖溶液的还原糖含量(以氨基葡萄糖计)。品溶液，取样品溶液3ml，加水稀释至5ml，再加2结果乙酞丙酮溶液lml，加无