关节内出血对关节软骨影响的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文关节内出血对关节软骨影响的实验研究姓名：陈金栋申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：陈百成20040301中文摘要关节内出血对关节软骨影响的实验研究摘要目的：探讨关节内出血对关节软骨产生的影响与病理变化过程，旨在对关节内出血给予及时合理的治疗。关节内出血在运动损伤中非常常见，经常造成关节内出血，关节软骨暂时处于一种血液浸润的环境。临床上往往予以保守治疗而另血液自行吸收，但是它将使关节发生骨关节炎的机率明显增加。本实验采用给实验动物兔膝关节内注入自体血的方法，模拟关节内出血的病理过程，

2、观察短期关节内出血对在体关节软骨的影响，主要包括大体观察、普通光镜观察、水、蛋白多糖以及胶原含量的改变，以探讨关节软骨损害的机制及其各种成分变化与时间之间的关系，并分析其发生变化的可能原因。方法：选取大耳白兔36只随机分为2组，每组18只。第l组：于第l天在右后膝关节内注入自体静脉血4ml，左后膝关节作为空白对照。在第3天重复一次，剂量同第l天。第2组：每只动物的右后膝关节内注入自体血4ml，左后膝关节2ml，其余步骤与第1组完全相同，以观察不同出血量对关节软骨的影响。把第1组和第2组实验动物再各随机分为3组

3、，每组6只，分别于1周、4周、8周取材。取材部位位于股骨内髁后部负重区的内缘与外缘中点，此点距内髁后缘3ram，宽约2mm。将标本置入含有1％氯代十六烷基吡啶的10％中性福尔马林溶液固定48小时，用于组织切片(保证用于Safranin0染色的切片为2张)。将股骨髁及胫骨平台中文摘要锯下，置于密闭的操作箱内，切取关节软骨。一半用于含水率的测定，一半用于胶原含量的测定。然后做以下几项测定：(1)软骨含水率：软骨组织在含P205的真空条件下进行干燥。软骨含水率=(软骨湿重一软骨干重)／软骨湿重X100％。(2)蛋白

4、多糖含量：按照Shin．ChiehHung的方法，从软骨表面到潮线之间分为3个区域，表层、中间层和深层。将显微镜及其摄像系统连接于多功能彩色病理图像分析系统。调整并固定计算机分析系统亮度后捕获图像：每张SafraninO染色切片随机捕获3张图像，每一标本获得图像6张。每张切片的浅、中、深三层分别取6、18、6个部位进行实域分割，计算机自动计算每副图像每层的平均光密度值。将每一标本的6副图像按层次(浅、中、深)分别求出光密度值的平均值，其值即代表着软骨每层蛋白多糖的含量。(3)采用生化比色法测定软骨胶原内羟脯氨

5、酸的含量。结果：(1)大体观察：受出血影响，关节软骨色泽稍暗，表面粗糙。第1周最为明显。4ml组重于2ml组。(2)HE染色结果：实验侧软骨表面不光滑，细胞排列欠整齐，细胞分裂相增多，可见软骨细胞簇聚。潮线变模糊。4ml侧比2ml侧变化明显。(3)II型胶原免疫组化染色：第l周，软骨表层染色稍变淡，软骨细胞周围浓染区染色无明显变化。第4周以后未见明显变化。(4)含水率的改变：i)与空白对照组比较：第1周及第4周含水率都显著增an(均为P<0．05)。第8周时与对照组无明显差异(p>0．05)。第4周低于第l周

6、(P<0．05)。第8周低于第4周(P<0．05)。(ii)4ml与2ml两实验组的比较：在第1周及第4周，4ml组含水率显著大于2ml组(均P<0．05)，在第8周两组间无显著性差异(P>O．05)。(5)关中文摘要节软骨各层蛋白多糖含量的改变：(i)与对照组比较：浅层在第1周及第4周明显低于对照组(均P0．05)。第4周大于第1周(P

7、P>O．05)。第4、8周均大于第l周(PO．05)。深层各组与对照组之间均无显著性差异(均P>O．05)。(ii)4ml与2ml两实验组的比较：浅层在第1、4周，4ml组均低于2ml组(均为P0．05)。中间层在第1周4ml组低于2ml组(P0．05)。(6)胶原含量的改变：(j)与对照组比较：在第l周胶原低

8、于对照组(P0．05)。第4、8周均大于第1周(P<0．05)。(ii)4ml与2ml两实验组的比较：4ml组在第l周低于2ml(P0．05)。结论：(1)采用Safranin0染色，结合计算机图形技术可对关节软骨蛋白多糖含量进行半定量测量分析，并能进行分层测定。(2)关节内出血模型能很好的模拟