PRLR等基因在不同羽型坝上长尾鸡皮肤组织中的表达变化研究

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1、硕士学位（毕业）论文PRLR等基因在不同羽型坝上长尾鸡皮肤组织中的表达变化研究学位申请人：张乐超指导教师：李兰会副教授学科专业：动物遗传育种与繁殖学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年五月二十八日分类号：S813.3单位代码：10086密级：公开学号：20152140285PRLR等基因在不同羽型坝上长尾鸡皮肤组织中的表达变化研究StudyoftheexpressionofPRLRandotherrelatedgenesinskintissueofdifferentfeatheringt

2、ypeBashangLong-Tailchickens学位申请人：张乐超指导教师：李兰会副教授学科专业：动物遗传育种与繁殖学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年五月二十八日本研究得到资助情况河北省现代农业技术体系蛋鸡产业创新团队（HBCT2013090206）摘要快慢羽性状被用于雏鸡性别鉴定，并且快羽鸡与慢羽鸡存在生产性能的差异。为了研究不同羽型坝上长尾鸡PRLR、SPEF2等基因在羽毛发育差异中的作用，本研究采集胚胎19和20天以及出雏0日龄的快羽和慢羽坝上长尾鸡的主翼羽和覆主翼羽的羽

3、毛，检测其长度；采集胚胎12、15、19日龄和出雏后0、15、20、35、56日龄的快羽坝上长尾鸡和慢羽坝上长尾鸡毛囊组织，提取DNA和RNA，利用RFLP对坝上长尾鸡的羽速类型进行检测，半定量RT-PCR检测PRLR两种剪接体的表达量，利用Protparam、PSORTII、SignalP4.1、TMHMM、SOPMA和SWISS-MODEL软件预测PRLR基因的两种剪接体编码蛋白的氨基酸理化性质和结构，并对PRLR基因启动子活性区域进行了探究；利用RT-qPCR检测PRLR（aPRLR）、SPEF2、FU

4、SION、FST和BMP2基因的表达量，分析基因表达与羽毛发育间的关系。结果表明，坝上长尾鸡的羽速表型是由PRLR和SPEF2基因的重复造成，而与ev21未占位区重复序列无关。快羽主翼羽和覆主翼羽长度20胚龄均显著高于19胚龄（P<0.05），而与出雏0日龄没有显著差异（P>0.05）；而慢羽主翼羽长度20胚龄与19胚龄没有显著差异（P>0.05），而显著低于出雏0日龄（P<0.05），慢羽覆主翼羽三个节点均存在显著差异（P<0.05），随日龄显著增长。快慢羽的羽速分化表现在：19~20胚龄慢羽相对于快羽主翼

5、羽生长速度降低，和20~21胚龄慢羽覆主翼羽仍然保持19~20胚龄较高生长速度，而快羽在该胚龄期覆主翼羽生速度降低。RT-PCR检测发现坝上长尾鸡毛囊组织中不存在含外显子8的PRLR剪接体类型，但存在2883（PRLRS1）和2400（PRLRS2）两种剪接体。半定量RT-PCR发现：D0慢羽鸡PRLRS1表达显著低于快羽（P<0.05），D15慢羽表达显著高于快羽（P<0.05）；E19慢羽鸡PRLRS2表达显著高于快羽（P<0.05），而D35慢羽表达显著低于快羽（P<0.05）。快羽鸡PRLRS1表达在

6、E15、E19和D56显著高于PRLRS2（P<0.05），慢羽鸡除在D0的PRLRS1表达显著低于PRLRS2（P<0.05）和出雏后D15二者表达没有显著差异外（P>0.05），孵化全期和其他出雏后期PRLRS1表达均显著高于PRLRS2（P<0.05）。由两种剪接体表达得出：（1）慢羽PRLRS2在E19-D0高表达可能与E19~20慢羽主翼羽生长速度降低有关，PRLRS2发挥抑制慢羽主翼羽生长作用；（2）PRLRS1D0期在快羽鸡高表达，可能与20~21胚龄快羽覆主翼羽生速度降低有关，PRLRS1发挥

7、抑制快羽覆主翼羽生长作用。（3）快慢羽鸡多个时点PRLRS1高表达于PRLRS2，再次说明PRLRS1发挥抑制覆主翼羽生长的作用，D0慢羽鸡PRLRS2的高表达起到抑制慢羽主翼羽生长作用。预测发现PRLRS1蛋白分子式为C4166H6472N1106O1298S40，相对分子质量为94102.25，包含831个氨基酸残基；PRLRS2蛋白分子式为C3461H5382N926O1076S34，相对分子质量为78270.41，包含688个氨基酸残基，均为不稳定的酸性亲水蛋白质。二者共有区域存在5个差异氨基酸位点，

8、PRLRS1为S、M、L、P、S，而PRLRS2依次为N、I、F、S、N。PRLRS1在第24位氨基酸有一个信号肽，而PRLRS2则没有。PRLRS1主要存在于胞外、高尔基体、内质网和细胞膜；而PRLRS2主要存在于细胞核，PRLRS1和PRLRS2均有跨膜区。对这两个蛋白二级结构分析认为二者均属于常规蛋白。克隆PRLR基因上游-37bp~-1738bp和-10252bp~-8957bp启动子区P2