禽流感（H9亚型）灭活疫苗的研制

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1、全日制硕士专业学位（毕业）论文禽流感（H9亚型）灭活疫苗的研制学位申请人：王子昌指导教师：胡满教授袁万哲教授学位名称：兽医硕士研究领域：不区分研究领域授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年六月三号分类号：S855.3单位代码：100861密级：公开学号：201692007901禽流感（H9亚型）灭活疫苗的研制Developmentoninactivatedvaccineagainstavianinfluenza(H9subtype)学位申请人：王子昌指导教师：胡满教授袁万哲教授学位名称：兽医硕士研究领域：不区分研究领域授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年六月三号

2、摘要H9亚型禽流感为低致病性禽流感，其感染禽类会引起呼吸困难、采食下降，就、产蛋率下降等临床症状。且易继发其他疾病，危害极大。H9亚型禽流感因其病原的特性，在新的宿主环境和免疫压力下已发生突变，这使得其难得到有效的防控。而且，H9亚型禽流感病毒其基因可以作为多种高致病型流感基因的基因载体，通过基因重组后能够产生对人有致病作用的新型病毒，威胁公共卫生安全。对H9亚型AIV的流行病学调查和对其致病性进化的掌握，可有助于我们更好的预防和控制H9亚型低致病性禽流感。本研究通过对河北地区禽流感病毒进行流行病学调查，了解H9亚型在河北地区的流行现状，并对H9亚型禽流感病毒进行分离，研

3、究其遗传进化和致病性，为该病的防控提供理论依据和技术支持。2017年～2018年收集河北地区各地方疑似H9亚型禽流感共计139份，通过检测，139份病料中有84份为禽流感，约占总病料的64.43%，通过血凝抑制试验进行分型，H9亚型65份，约占77.38%。H9亚型AIV发病季节主要在1、2、3、4和12月，发病日龄分布较广，蛋鸡集中在1月龄，肉鸡集中在3周龄。选取SPF鸡胚分离病毒，传至5代，分离得到两株禽流感病毒，命名为ZD5和SD。测定血凝价ZD5为9log2，SD为8log2，EID-8.75-7.2550为10和10，通过HA基因设计引物，目的片段为550bp，

4、与27株河北省参考株进行比对，两株分离株之间同源性为95.8%，ZD5与A-chicken-hebei-0822-2007、A-chicken-hebei-C6-2007同源性最高，为967%；SD与A-chicken-hebei-C6-2007、A-chicken-hebei-0822-2007同源性最高，为90.1%。两株分离株都与2007年参考株亲缘关系较近。通过人工感染试验，将ZD5肌注21日龄SPF鸡，使其发病。临床症状为流鼻涕，打喷嚏，张口呼吸。剖检可见气管有粘液，肺部病变，腺胃乳头肿大出血，盲肠扁桃体出血。组织学观察可见气管黏膜脱落，部分管腔有浆液性渗出物及

5、炎性细胞；肺部血管有炎性渗出物，肺泡内充斥红细胞，肺泡轮廓不完整。分离株ZD5的潜伏期大约为3天。攻毒后第5天采集棉拭子通过SPF鸡胚分离，其分离率达到90%，尿囊液可凝集1%鸡红细胞。将ZD5作为制备疫苗的毒株，将其灭活配制水相，再与油相按油水比为3:1的比例混匀乳化，制备成油乳剂灭活苗。根据兽医药典规程检测疫苗的剂型、稳定性、粘度、无菌、安全性和效力，检测结果表明：制备的灭活苗其剂型为油包水型，稳定性良好，粘度符合标准，无菌，注射动物体内无不良反应，免疫SPF鸡后，鸡的HI抗体水平显著提升，免疫21d后攻毒，其保护率为100%。关键字：禽流感；H9亚型；分离；致病性；

6、疫苗Developmentoninactivatedvaccineagainstavianinfluenza(H9subtype)Candidate:WangZichangAdvisors:Prof.HuManProf.YuanWanzheMajor:VeterinaryMedicineAbstractH9SubtypeAvianInfluenzaisatype3diseasethathasoccurredandbeenreportedinmanycountriesandregionsthroughouttheworld.Itspreventionandcontrolha

7、vebecomethefocusofcommonconcernintheworld.InChina,birdfluhasalsobroughtalotofeconomiclossestoChina'spoultrybreedingindustry.BirdfluviruseshavebeenreportedinmanyprovincesandregionsinChina.H9subtypeavianinfluenzaisalow-pathogenicbirdflu,butitisalsonowendemicinChina.Bi