补肾活血法对退变腰椎间盘动物模型no、pg表达的影响

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1、万方数据·454·【实验研究】浙江中医杂志2010年6月第45卷第6期补肾活血法对退变腰椎间盘动物模型NO、PG表达的影响王健1严根福21浙江省立同德医院浙江杭州3100122浙江省天台县中医院浙江天台317200摘要目的：建立一种新的榷间盘退变模型并在其形成过程中观察蛋白多糖(PG)、一氧化氮(N())含量的变化，探讨补肾活血法对腰椎问盘退变动物模型PG、No表达的影响及作用机理。方法：40只SD大鼠随机分为4组，正常对照组(A组)、模型对照组(B纽)、中药治疗组(C组)和西药治疗组(D组)，

2、每组各10只动物。将B、C、D三组动物通过手术制作腰椎间盘退变动物模型，造模后3天分别给予生理盐水、补肾活血中药和芬必得灌胃治疗6周。处死全部动物，取出椎间盘组织，分别测定PG和N0的含量。结果：B组与A组比较，椎间盘中PG含量明显降低，而NO含量明显升高，有非常显著性差异(P<0．01)；且N0与PG含量的变化存在较强的直线相关关系(P<0．01)；C组和D组对PG含量有明显升高的作用(P<0．01)，对N0含量却有明显降低的作用(P<0．01)；C组和D组比较，PG和N0含量变化不大，无显著

3、性差异(P>0．05)。结论：一氧化氮参与了椎间盘的退变过程。补肾活血中药对腰椎间盘退变有明显的预防和治疗作用，补肾活血法防治腰椎间盘退变的机制可能与减缓椎间盘基质中的蛋白多糖降解、减轻退变炎症反应程度和改善局部微循环、防止自由基过量产生等有关。关键词．腰椎间盘退变补肾活血法蛋白多糖一氧化氮表达大鼠实验研究腰椎间盘的退行性变是导致腰椎间盘突出的基本的病理变化过程，已被公认为是引起脊柱退行性变的根本原因。它可引起一系列脊柱退行性变及继发性病变，与其相关的临床综合征包括原发性下背部疼痛，腰椎不稳、腰

4、椎滑移、骨赘形成、腰神经根病及椎管狭窄等。但引起椎间盘退变的机理目前仍不清楚。中医学在防治椎间盘退变及其继发病变方面具有独特的优势。利用中药治疗并进行定量研究，阐明其作用机理，将为脊柱退行性病变的防治提供一条新的思路。本实验通过腰椎间盘退变动物模型的建立，研究补肾活血中药对退变腰椎间盘大鼠模型椎间盘组织中的N0、PG含量的影响，探讨N0在椎间盘退变过程中的作用以及腰椎间盘退变的病理机制；同时对补肾活血中药防治腰椎间盘退变的作用原理作初步探讨。1材料与方法1．1实验动物：健康的SD大鼠40只，雌雄

5、各半，体重200士209，购自并标准饲料饲养于浙江中医药大学实验动物中心。1．2实验药品：芬必得胶囊：300mg／粒，中美合资天津史克制药有限公司，批号：90卫药准字一129号。每500ml生理盐水加500mg配制成溶液。补肾活血中药制备：人工麝香、龟版、陈皮、枳壳、黄芪、熟地、知母、杜仲、牛膝、当归、川芎、三七、红花、砂仁、山药等，水煎浓缩，用蒸馏水调药物浓度至loo％，含生药lg／ml。8磅20分钟高压灭菌，40℃冰箱保存备用。1．3主要试剂及仪器：木瓜蛋白酶，华美公司进口分装；NO试剂盒，

6、南京建成生物工程研究所；DY89一l型电动玻璃匀浆机，721-100型分光光度计，上海医疗仪器五厂；LD4一ZA型离心机，北京医用离心机厂。1．4动物造模及给药方法：选用健康的SD大鼠40只，随机分为4组，正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、中药治疗组(C组)和芬必得治疗组(D组)，每组动物各lo只。标记各组动物后于安静环境下饲养。B、C、D组30只SD大鼠，2％戊巴比妥钠45mg／kg，腹腔内注射麻醉，腹卧位以L4-5棘突间隙为中心，取后正中切口，长约5cm，切开皮肤及皮下组织，钝性分离腰

7、椎旁肌，自动拉钩牵开，用咬骨钳及组织剪去L4-5棘突、椎板及双侧关节突关节，逐层缝合。术后肌注5万单位青霉素钠针剂，共3天。普通饲养。造模后3天C组按每天209／kg的剂量灌服补肾活血中药；D组按每天200mg／kg的剂量灌服芬必得水溶剂；B组和A组均灌服相同剂量的生理盐水。1天2次，连续6周。6周后所有实验动物脱颈处死，钳取整段腰椎，取出L4—5椎间盘，分为两半，分别编号、称重、记录，并进行椎间盘组织N0和PG含量的测定。1．5统计方法：用SPSSl0．0统计软件分析处理，计量万方数据浙江中医

8、杂志2010年6月第45卷第6期资料数据用均数土标准差(z±s)表示。多组间均数的比较用方差分析，组问均数的比较用q检验；均以P<0．05为差异显著的检验标准。N0与PG的变化量之间用相关回归分析法。2结果2．1造模评价：造模后B组、C组及D组腰椎间盘PG含量均较A组明显下降，经方差分析四组均数间差异有高度显著性(尸<0．01)。而三组腰椎间盘NO含量均较A组明显升高，经方差分析四组均数间差异有高度显著性(P