肇庆学院生命科学学院生物实验技能决赛实验设计书——珍稀药用植物金线莲质量测定的初步研究

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1、肇庆学院生命科学学院生物实验技能决赛实验设计书参赛作品题目珍稀药用植物金线莲质量测定的初步研究参赛者资料姓名性别班级长短号XXX男XXX女XXX女XXX女珍稀药用植物金线莲质量测定的初步研究摘要：以金线莲为试验材料,通过测重法测定生物量与含水量、蒽酮比色法测定可溶性总糖的含量，对评价其质量做初步探讨，同时为金线莲进一步研究与开发提供一定参考意义。关键词：金线莲生物量含水量可溶性糖测定金线莲［Anoectochilusroxburghii(wall.)Lindl］为兰科开唇兰属（Anoectochilus）多年生草本植物，又名花叶开唇兰、金线兰，是我国传统珍贵药材，素有

2、“药王”、“金草”、“神药”和“乌人参”等美称[1]。据研究报道，金线莲中氨基酸组成、成分含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于国产和野生西洋参[2]，且富含有多糖、强心苷类、有机酸、甾体化合物、黄酮类化合物、生物碱等[3-5]等多种成分，广泛应用于风湿性关节炎、高血压、糖尿病、肾病和尿血等症状的治疗，以及病后体虚恢复等方面，被称为“药中之王”[3,4]。此外，金线莲还是的一种室内观叶珍品。目前，金线莲的质量标准尚未被制定，较统一的意见为市售金线莲鲜品、干品多糖均不低于15%（以干基计），黄酮均不低于0.8%（以干基计），干品另外要求水分小于12%[11]。可见，金线莲

3、质量（生物量、含水量及糖的含量等）的测定对金线莲进一步研究有着重要意义。图1金线连7/71实验仪器仪器名称仪器规格仪器数量电热鼓风干箱CSIOI3型，重庆1电子天平（千分之一）YP3001N型，上海1电子分析天平（万分之一）AE240型，常州1低速台式离心机TDL-6013型，上海1离心管10mL1容量瓶25mL3称量纸——10封口保鲜袋——5数显恒温水浴锅HH-4型，常州1可见分光光度计722S型，上海1移液器5000μL，1000μL，200μL3烧杯500mL，250mL，100mL5三角烧瓶100mL3量筒100mL，10mL1比色皿1cm8试管15×1501

4、0玻璃棒——1试管架——1吸水纸——1擦镜纸——12实验材料及试剂（试剂浓度等在第一栏注明）名称（浓度）数量材料新鲜金线莲植株（自备）50.0g试剂80%乙醇（V/V，分析纯）100mL80%浓硫酸（V/V，分析纯）100mL蒽酮试剂（2.0mg/mL，分析纯）100mL标准葡萄糖溶液（200μg/mL，分析纯）100mL蒸馏水500mL7/73实验目的本实验旨在对金线莲的质量进行测定，通过实验掌握植物生物量与含水量的测定方法[6]，理解并掌握蒽酮法测定可溶性总糖含量的原理与方法[7-8]，为进一步研究做好铺垫。4实验原理4.1生物量与含水量的测定狭义的生物量是用生物

5、的重量表示，可以是鲜重或干重。考虑到金线莲作为中药材即可鲜草出售，又可干草出售，故此，既测其鲜重，又测干重。利用水遇热蒸发的原理，加热使植株内的水分蒸发，测出干重，即又可测含水量[6]。4.2可溶性糖的测定可溶性糖在浓硫酸作用下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色衍生物，在620nm处有最大吸收峰。在一定范围内（≤150μg/mL），颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于可溶性糖的定量[7-8]。图2反应原理图3糠醛衍生物溶液的吸收光谱7/75实验方法及步骤5.1试剂的配制蒽酮试剂：称取0.200g蒽酮溶于100mL的硫酸溶液（在30mL蒸

6、馏水中缓慢加入76mL比重为1.84的浓硫酸），即得2.0mg/mL的蒽酮试剂，贮于棕色瓶内，冰箱保存，最好当日配制使用；标准葡萄糖溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水，并稀释至500mL，即为200μg/mL的标准液。5.2材料的处理取新鲜金线莲地上部分，弹去尘土（若表面有污物，需洗净，再用吸水纸吸去表面水分），分为三组，并分别标记为A1、A2、A3，放在称量纸上迅速称鲜重（FW）；将上述材料放入信封中，做好标记，放入烘箱，在105℃下杀青30min，然后将温度调到65℃烘至恒重，时间在10h左右；取出烘干的材料，称量干重（DW），以上结

7、果记录于表1；将干样品研碎、过60目筛，妥善保存，供后续测定。5.3金线莲生物量与含水量的测定根据表1，计算含水量WC=（FW-DW）/FW×100%。5.4金线莲可溶性总糖含量的测定5.4.1提取与分离称取干样粉末50～100mg（平行3份）于10mL离心管中，分别标记为B1、B2、B3；加入5mL80%乙醇溶液，摇匀，80℃水浴40min，期间不时搅拌；用少量80%乙醇溶液冲洗玻璃棒，并将溶液冷却至室温；4000g离心10min，上清液转入25mL容量瓶中；再向残渣加5mL80%乙醇溶液，摇匀，重复在80℃水浴中提取两次；合并上清液于25mL容量