灭活剂和佐剂课件

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1、灭活剂和佐剂第一节灭活剂灭活是生物制品中的一项非常基本技术！！！提高生物制品的安全性防止病原体扩散一、灭活与灭活剂（一）什么是灭活？微生物学意义上灭活有两层含义：1、是指破坏或杀死微生物使其成为没有生命物质的过程。2、生物制品上的灭活还有灭能的含义，是指将一些活性物质（微生物及其代谢产物、激素、酶、血清因子和抗体等）丧失活力的过程。例如：经过56度加热30分钟处理，可破坏诊断血清和待检血清中的补体活性，从而避免补体对诊断的干扰作用。生物制品意义上灭活的含义：是利用物理或化学的方法，破坏微生物的生物学活性，破坏病原微生物的繁殖能力和致病能力，但仍然保留反

2、应原性和免疫原性的过程。（二）灭活的类型按照灭活作用的性质可分为两类：1.物理灭活2.化学灭活1、物理灭活热灭活：容易发生菌体蛋白质变性超声波灭活：应放在冰浴中间断进行紫外线灭活：不够好射线照射灭活：根据被照射物的容量大小选择照射距离和照射强度。2、化学灭活利用化学药品等使微生物、活性物质的某些某些结构位点发生改变，从而丧失生命力、感染性、毒性或活性。效能常受灭火剂种类、剂量和作用温度、pH、时间等因素的影响，使用时必须筛选最佳的灭活条件。方法简单、效果确实、最为常用。（三）灭活剂用于灭活微生物的化学试剂或药物1911年，LowensteinDH用甲醛

3、处理破伤风毒素而制成类毒素1924年，Puntoni以苯酚或甲醛处理制成犬瘟灭活苗1934年，MorionDorset等用结晶紫灭活猪瘟病毒制成猪瘟结晶紫疫苗。是最古典、使用最广泛的灭活剂《兽医生物制品制造及检验规程》（2000）中的26种灭活疫苗，均以甲醛作为灭火剂。二、常用灭活剂的灭活机理与应用1、甲醛甲醛的水溶液——福尔马林(含甲醛36~40%)灭活机理：还原作用氨基甲基胺羧基亚甲基二醇单酯巯基亚甲基二醇甲醛醛基羟基羟基甲酚灭活浓度：需氧细菌0.1％～0.2％，厌氧细菌0.4％～0.5％，病毒0.05％～0.4％。灭活原则：低浓度、短时间而又能达

4、到彻底灭活目的。必要时可在灭活后加入焦亚硫酸钠，以中断其反应。N-乙酰乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺(BEI)、缩水甘油醛（GDA）灭活机制：1.烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂或双螺旋链交联，因改变DNA的结构而破坏其功能，妨碍RNA的合成，从而抑制细胞的有丝分裂。2.与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。2.烷化剂（Alkylatingagent）优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而不损害其蛋白衣壳，保留其保护性抗原。（1）N-乙酰乙烯亚胺（AEI）淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。0～4℃可保存1年

5、，在-20℃可保存2年。AEI功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。口蹄疫病毒液:终浓度0.05％，30℃8h,加2％硫代硫酸钠阻断（2）二乙烯亚胺（BEI）市购商品为0.2％的BEI溶液，在0～4℃可保存1个月;口蹄疫病毒悬液：终浓度0.02%,加入2％硫代硫酸钠中断灭活。大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/ml。0～4℃保存3个月后含量渐下降，约半年失效；20℃只能保存10d。（3）缩水甘油醛（GDA）3.苯酚又称石碳酸。有腐蚀性，而且有毒！易溶于水及有机溶剂。灭活机制：使微生物蛋白质变性和抑制

6、如脱氨酶、氧化酶等酶系统的活性，从而导致微生物死亡。通常：生物制品的常用量为0.3%-0.5%,另外，芽孢、真菌和病毒对苯酚的耐受性很强。4.结晶紫是甲基紫、龙胆紫的纯品。灭活机制：是结晶紫阳离子与微生物蛋白质带阴性电荷的羧基形成弱电离的化合物，从而干扰微生物正常代谢和氧化还原作用，主要干扰细胞壁肽聚糖的合成，导致革兰氏阳性菌生长繁殖受阻。5.β-丙内酯又名丙内酯。灭活机制：破坏病毒的核酸芯，但不损坏衣壳蛋白，因此保护性抗原成分得以保留，主要用于狂犬病灭活苗的制备。然而研究表明，丙内酯是一种潜在的致癌因子。6.硫柳汞常用做生物制品的防霉和消毒剂，对霉菌

7、、细菌和病毒都有一定的灭活作用，百日咳菌苗作为灭火剂。常用浓度为0.01%-0.02%。1、灭活剂特异性：如石炭酸对真菌和病毒效果差，但对细菌效果好。结晶紫能杀死多种革兰氏阳性菌和阴性菌，但对绿脓杆菌和细胞芽孢作用弱。2、微生物种类和特性：三、影响灭活作用的因素3、灭活剂浓度（一定要适合）4、灭活温度：通常同一浓度的灭活剂在不同温度的灭活速度与温度成正比，但温度太高，对微生物的抗原性将有不利影响。（具体不同病原体或毒素，其灭活时间和温度不一致）。5、灭活时间：一般采用低浓度、低温和短时间处理为最佳。6、灭活pH值：7、微生物含氮量：一般微生物或毒素的总

8、氮量和氨基氮含量越高，灭活剂的消耗量就越大、灭活脱毒越慢。8、有机物存在：第二节佐剂佐剂是免疫