疟原虫显微镜镜检技术

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1、疟原虫显微镜镜检技术东安县疾病预防控制中心周永玲2011.07.10疟疾简介疟疾是一种古老的传染病,俗称“冷热病”、“打摆子”、“发疟子”、“脾寒”、“瘴气”等，是由疟原虫寄生于人体引起的传染性寄生虫病。寄生人体的四种疟原虫间日疟原虫[Plasmodiumvivax，P.v]三日疟原虫[P．Malariae,P.m]恶性疟原虫[P．Falciparum,P.f]卵形疟原虫[P．Ovale,P.o]我国主要是间日疟常见，恶性疟次之，三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。镜检疟原虫方法简述19世纪后期，显微镜的出现使人们不断发现了传染病的病因。1880年法国军医拉韦朗第一次见到并描述了人红细胞

2、内的疟原虫，至此才解开了困扰人们数千年的疟疾的病因之谜。镜检疟原虫方法简述目前用于疟疾诊断的实验室检测包括病原学检查、免疫学检测和分子生物学检测三类。镜检疟原虫由于具有操作简便、敏感、价廉和可鉴别虫种等优点，广泛用于疟疾的病原学诊断已愈近一个世纪，仍是目前最常用的方法，也是我国疟疾诊断标准确定的实验室检查方法（WS259-2006）。镜检目的与意义疟疾诊断标准中把疟疾病例分为疑似病例、临床病例、确诊病例和带虫者，前两者依据流行病学史和临床表现即可做出诊断，而后两者需通过发现病原体方能做出诊断。通过对发热病人血检达到确诊疟疾病例。及时发现传染源和明确感染的疟原虫种类，以能针对虫种选择正确的

3、治疗方案。血片镜检血片制作用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜。一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。血膜的制作（取血时间）取血时机现症病人一般可随时取血，疟疾普查时可不考虑取血时机。在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。间日疟在寒热发作时，外周血液中主要可见环状体期；发作后数小时，环状体发育到滋养体期，疟色素形成，形态较易辩认，为诊断的有利时机；36~48小时，可检出裂殖体；发作一、二次后，配子体出现较多。恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20小时内取血，初发患者退热后常查不到原虫。血膜的制作（取血操作）取血方法采

4、血部位一般人为耳垂，指头，通常在耳垂取血（现场取血建议用大头针采血，一人一针，避免血传疾病）。先用75%酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右手持消毒针迅速刺入耳垂下端1~2毫米，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向挤压出血。血膜的制作（取血操作）取血量及涂片法（涂片操作）薄血膜取洁净的载玻片2张，1张平置在桌上，以左手拇指，食指夹持载玻片两端（手指切勿接触玻片表面），用另一张边缘平滑（最好为磨口边缘）的载玻片做推片，用推片一端边缘的中点从取血部分取约1微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成

5、25~30度夹角，待血液向两侧扩展约2厘米长度时，均匀而迅速地轻轻向左推出（约2.5厘米长），整个血膜成舌形。正确的推片姿势取血量及涂片法（涂片操作）厚血膜用推片的一角，从取血部位刮取约4微升血量（相当于火柴头小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。涂制厚、薄血膜的位置通常是将厚、薄血膜涂在一张载片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片

6、1人，涂2个厚血膜1个薄血膜，以防血膜脱落而影响检查。标准的疟疾厚薄血膜片位置血片的染色一、吉氏染液母液配制取吉氏粉0.5克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，边加边磨，至25毫升加完为止，倒入60或100毫升带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至25毫升甲醇洗净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于55~60℃水浴中2小时，或室温内3~5天，每天用力摇动5分钟，即成原液。吉氏染液是目前较优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经久不变。血片的染色二、瑞式染液的配制将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇洗

7、出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后，置室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。此方法染色的时间短，但染色效果不如吉氏染液效果稳定，又不能大量血片染色，可用于门诊应急血片用。血片的染色吉氏染液血片染色方法（推荐使用此方法）先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白可用滴管滴水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倾去，晾干后进行染色。成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入2%吉氏染