重要动物组织切片制作技术

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1、1动物组织标本制作技术2第一章：取材及固定一、动物致死法1、麻醉法可将浸有乙醚或氯仿的棉球连同小动物一起密封于钟罩或有盖玻璃瓶内进行麻醉；也可用4%戊巴比妥作静脉注射，剂量按动物体重1ml/kg；或用20%氨基甲酸乙脂作腹腔注射，剂量一般按动物体重5ml/kg。2、空气栓塞法如家兔可用50ml注射器将空气由耳静脉推入，使动物很快死亡。33、击头法如大、小鼠，可用重物击头后部或将其头后部猛撞桌沿，最好一击而死。4、断头法青蛙、小鼠等小动物，可用剪刀剪去其头部，较大动物如兔子等，可用斧头迅速砍头致死。5、股动脉放血法动物经吸入乙醚或氯仿稍麻醉后，立即切开股动脉放血。注意：上述各法，应根据制片需要选

2、用，如空气栓塞法不宜用作血管注射标本的制作；乙醚麻醉对丘脑下神经部分泌物染色标本不利；股动脉放血法有利于肠系膜铺片的制作。4二、取材注意事项1、材料新鲜最好是动物心脏还在跳动时取材，立即投入固定液内，脏器的上皮组织最易变质，应争取在死后半小时内处理完毕。2、组织块力求小而薄组织块的厚度以不超过5毫米为宜，较理想的厚度为2毫米左右，主要目的是使固定液迅速而均匀的渗入组织块内部。3、勿使组织块受挤压切取组织块时刀剪要锋利，不要来回挫动，夹取组织时切勿猛压，取材时组织块可稍大，以便固定后修块。54、尽量保持组织的原有形态新鲜组织经固定后，或多或少产生收缩现象，为此可将组织展平，以尽可能维持原形。5、

3、要熟悉取材部位要能准确的按解剖部位取材，如胰腺，一般取胰岛较多的胰腺尾部；肺应取有细支气管及带有软骨片的小支气管部。6、动物品种的选择如观察肥大细胞，以大、小鼠皮下组织及肠系膜、大网膜铺片为佳，欲观察运动终板，可用小鼠的肋间肌等。67、选好组织块的切面熟悉某些器官组织成分安排，然后决定其切面的走向；如一长管状器官以横切面较好。8、保持材料的清洁组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用生理盐水冲洗，然后再入固定液，但要注意防止组织损伤。9、切除不需要的部分特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，否则给固定、脱水、浸蜡、切片等带来一些不必要的问题。7三、组织固定法（一）、固定的方法1、小块

4、组织固定法：从人体和动物取下的小块组织，立即置入液态固定剂中进行固定，这是应用最广泛最经常的方法。2、注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定。这时宜采用注射固定法，将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。3、蒸汽固定法:比较细小而薄的标本，可用锇酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或细胞涂片以及某些薄膜组织的固定。8（二）、固定的目的1、迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生前的状态与结构。2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持其原有状态。3、使组织内各种物质成分产生不

5、同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察。94、使组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程中不易损坏。5、使不同组织成分对染料有不同的亲和力，经染色处理后易于辨认。6、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。7、使组织块硬化，便于制作薄片。10（三）、注意事项及影响固定的因素1、组织块不易过大，一般以厚度5mm，长宽不超过15×15mm。2、固定液的量一般以组织块大小的20倍为宜。3、必须选择渗透力强，又不使组织过渡收缩或膨胀的试剂作为固定液。4、有的固定剂是由氧化剂与还原剂混合而成，如甲醛（还原剂）与重铬酸钾（氧化剂）混合成的Helly液等。115、固定时间的长短视固定剂的不同要求而定，也与气温

6、、组织块的大小有关。温度高时则时间缩短，组织块过大则应延长固定时间。6、软组织或较大组织可先经2-3小时固定后再修整成小块重新投入新配制的固定液内继续固定。7、特殊要求的组织，常需要特殊的固定液，所以，取组织之前应做好准备。如各种神经组织因显示内容不同，需不同的固定液与固定方法。12（四）、固定液1、固定液种类：一类是单纯固定液，即只有一种试剂；另一类是混合固定液，由两种或两种以上试剂组成。作为较好的固定液，应有下列特性，首先，有强渗透力，能迅速的渗入组织内部；其次，不使组织过渡收缩或膨胀，并能使组织内欲观察的成分得以凝固为不溶性物质；最后，能使组织达到一定的硬度并获得较佳的折光率和对某些染料

7、具有较强的亲和力。132、单纯固定液（1）酒精：既是配制混合固定液的基本成分，又可作为单纯固定液使用。用于固定时以80%-95%浓度为好。缺点是经酒精固定的组织容易变硬，对组织收缩较大。（2）甲醛水溶液：常用的甲醛水溶液即市售的福尔马林，常用浓度为10%，指以10ml的商品甲醛（37%-40%甲醛水溶液）加入90ml水配成的，此液实际上只有4%的甲醛。14（3）醋酸：亦名乙酸，能与酒精、水、氯仿等