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1、《环境微生物学》综合性实验——清洁水体与污染水体中微生物群落分布的测定陈凡2010240003710环科组员：陈凡傅永邦李炬华李骏斌曾锦萍何浩斌摘要：随着工业化和城市化进程的加快，我国河流普遍受到了不同程度的水质污染，而微生物指标对于水质评价具有重要作用。本实验在官洲河中选择清洁与污染区域分别进行采样，然后测定水体中微生物的种类和数量，染色观察，分析两种水体中微生物群落的分布特点以及污染物对水体中微生物群落的影响。关键词：官洲河、微生物、污水处理、分离纯化1前言在水生生态系统中,水生生物是物质循环和能量流动的中心环节。任何生态因子的变化都会使水生生物的群落结构发生相应的改变,反过
2、来也可以通过了解生物群落的变化来了解水体的水质状况。特别是在水体污染的情况下,生物群落结构发生变化比自然条件下更加复杂、更加剧烈。通过对生物的个体生态系、种群生态系和群落生态系的研究,便可以了解生物体所处的环境特征,反映水质的瞬时变化,也可以连续观测水质变化,反映低浓度污染物对生物体的潜在危害。[1]本实验对官洲河的对照断面、控制断面、削减断面三个断面水体的微生物现状进行调查与分析,并进行科学评价。2实验方案与思路2.1水样的抽取与保存2.2水样微生物的观察2.3制备培养基2.4水体微生物分离纯化2.5单菌种的扩大培养，在三角瓶中液体培养基培养2.6菌种初步鉴定3实验方法3.1水
3、样的抽取与保存3.1.1抽取水样根据上图，分别在官洲河排污口的上游（对照断面），污水处理厂下游（控制断面）及下游较远处（消减断面）取水样，用绳子绑住准备好的矿泉水瓶丢到河中央取水，水瓶不能装太满，大约2/3瓶，因为需留适量空气在瓶中防治水样中微生物过早死亡，并盖紧盖子以防污染；取水时间为早上10点至11点；所取水为表层水样。以下为取水位置：3.1.2水样的保存为防止微生物发生质的改变,装好的样品瓶要在绝热箱中运送。当外界温度较高时还要冷却,采样容器也不要受任何直接阳光照射,以免紫外线杀死微生物。采好的水样应立即送往实验室,一般从取样到检验不宜超过两小时,否则应使用10oC以下的冷
4、藏设备保存样品,但不得超过6小时,实验室接到送检样品后,应将样品立即放入冰箱,并在两小时内进行检验,如果因路途遥远,送检时间超过6小时,应考虑采用延迟培养法。[2]3.2水样微生物的观察仪器与材料灭菌塑料瓶、光学显微镜、载玻片、盖玻片、水体样本3.2.1用压滴法制作水体样本的标本片取一片干净的载玻片放在实验台上，用滴管吸取样品于载玻片中央，用干净的盖玻片覆盖在液滴上（注意不要有气泡）即成标本片，用低倍镜和高倍镜观察，要充分利用显微镜的移片夹的移动，注意观察微生物组成。制作方法如下图2所示。[3]图23.2.2用光学显微镜观察记录微生物形状及其活动方式，从而判断微生物种类；3.2.
5、3水样微生物总数的测定3.3.2.1细胞计数（1）稀释：将样品稀释至合适的浓度。（2）加被测样品至血球计数板：取已洗净的血球计数板，将盖玻片盖住中央的计数室，用细口滴管吸取少量已经充分摇匀的菌液于盖玻片的边缘，菌液则自行渗入计数室，静止5—10min，待菌体自然沉降并稳定后即可计数。（3）计数：先用低倍镜寻找大方网格的位置，找到计数室后将其移至视野的中央，再换高倍镜观察和计数。需不断地上、下旋动细调节轮，以便看到计数室内不同深度的菌体。3.3.2.2计算方法结果计算：先求得每中格菌数的平均值，乘以中格数，即为一大格中的总菌数，再乘以104，则为每毫升稀释液的总菌数，再乘以稀释倍数
6、即为原液的总菌数[4]。两种不同规格的血球计数板的计算方法如下：（1）16×25的计数板计算公式：细胞数（mL）＝（100小格内的细胞数/100）×400×10000×稀释倍数（2）25×16的计数板计算公式：细胞数（mL）＝（80小格内的细胞数/80）×400×10000×稀释倍数3.3制备培养基仪器与材料高压蒸汽灭菌器、培养皿、试管、烧杯、量筒、药物天平、玻璃棒、石棉网、药匙、pH试纸、酒精灯、锥形瓶、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH、琼脂、3.3.1玻璃仪器准备：洗涤→包装→高压蒸汽灭菌→分装→冷冻保存3.3.2培养基的配制：①成分：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，
7、琼脂15-20g，淀粉2g，蒸馏水1000ml。②方法：取牛肉膏0.5g，加水100ml，再加入蛋白胨、氯化钠、加热使之完全溶解，调整pH值至7.2～7.4，分装，高压灭菌后备用。向灭菌后冷却至50—60oC的培养皿倒入一定量的灭菌后的溶液，将培养皿放置于无菌室冷却备用。【液体培养基的组成(g/100mL):NaH2PO4*2H2O0.1g,MgSO4*7H2O0.05g,蛋白胨0.5g,葡萄糖1g,pH自然。】3.4水体微生物分离纯化仪器与材料酒精灯、锥形瓶、接种环、恒温培养箱
