白芍高效液相色谱指纹图谱的研究

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1、白芍高效液相色谱指纹图谱的研究【摘要】目的研究白芍的高效液相色谱指纹图谱，为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法利用HPLC方法，梯度洗脱，测定了21批白芍样品。色谱条件为：HypersilC18柱，流速ml/min,柱温25℃，流动相A为乙腈；流动相B为%磷酸水，流动相A梯度洗脱(95%～65%乙腈)，分析时间为60min，时间为0，15，25，60min，A(%)为95%，86%，86%，65%。结果21批白芍样品获得包括芍药苷；flow-rate：ml/min；columntemperature：25℃;mobilephase：aceto

2、nitrileandH2O(acidifiedto%withphosphoricacid)(B).TheconcentrationsofsolventAwere5%，86%，86%and5%at0，15，25,60min，respectively．ResultsTheHPLCchromatographicfingerprintofRadixPaeoniaeAlba，showing1characteristicpeaks，wasestablishedfrom1lotsofRadixPaeoniaeAlbaproducts．Theresultsofsim

3、ilarityanalysiswasthesameasthatofherarchicalclusterchromatographicfingerprintofRadixPaeoniaeAlbawithhighspecificitycanbeusedtocontrolitsqualityandassuretolotconsistency．Keywords：RadixPaeoniaeAlba；Paeontflorin；HPLC；Fingerprinting白芍为毛茛科植物芍药PaeonialactifloraPall的干燥根。文献［1］报道，其主要成分为

4、芍药苷、芍药内脂苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷，通称芍药总苷。具有抗炎、抗病毒、解痉镇痛、护肝等多种药理活性［2～4］。色谱指纹图谱方法是评价植物药质量的有效方法之一。本文应用HPLC方法对白芍指纹图谱进行了研究,以期为全面控制白芍质量提供可靠方法。　　1仪器与试药仪器高效液相色谱仪(四元泵、柱温箱、MVD和DAD检测器，Agilent1100色谱工作站)、电子分析天平AE240、CQ250超声波清洗器；UV-3300。对照品与对照药材芍药苷对照品；白芍对照药材，均购于中国药品生物制品检定所。白芍药材经江西中医学院药用植物学科组鉴定符合XX年版《中国药

5、典》白芍项下标准。乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。　　2方法与结果.1色谱条件色谱柱为HypersilC18柱；流动相为A：乙腈；B：%磷酸水；柱温25℃。线性梯度见表1。表1梯度洗脱.2检测波长确定取样品溶液，分别在210，230，254，27nm处检测。结果表明，254，27nm处各色谱峰之间分离度好，但峰数少；210nm检测，峰数与230nm检测基本一致，但基线不稳定，不能准确积分；以230nm检测，峰数多，基线平稳，故选之。.3提取方法的考察本实验对甲醇、95%乙醇索氏提取，甲醇、50%乙醇回流提取，甲醇、95%乙醇超声提取，对

6、提取溶剂、提取方法进行了考察。结果表明，95%乙醇超声提取4min后,所得色谱峰的峰数为最多。后又对50%，75%，95%乙醇超声提取进行实验，发现三者之间峰数无显著性变化，本文采用50%乙醇作为提取溶剂进行超声提取。.4对照药材和供试品溶液的制备精密称取对照药材和样品干燥粉末各g，分置50ml量瓶中，精密加入50%乙醇50ml，称定重量，超声提取4min，冷却，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，用流动相）稀释至10ml，摇匀，过μm滤膜，各取续滤液作为对照药材溶液和供试品溶液。.5对照品溶液制备精密称取芍药苷对照品

7、适量，加50%乙醇制成每毫升含80μg的溶液，即得。.6色谱条件的确立根据上述结果，最终确立的色谱条件为：色谱柱：HypersilC18柱流动相：乙腈-%磷酸水，梯度见表1；检测UV30nm；流速ml/min；柱温:25℃。在上述色谱条件下，取对照品溶液、对照药材溶液和样品溶液各进样10μl进行HPLC-FP测定，结果对照药材与样品中的各个峰分离较好，对照品芍药苷峰与样品中芍药苷峰保留时间一致，并且与样品中其它组分达到了很好的分离。.7精密度实验精密称取12号样品，按供试品溶液制备方法操作，连续进样6次，记录其指纹图谱。用国家药典委员会推荐的“中药色

8、谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范”软件(版本00A)处理数据，结果表明，各色谱峰的相对保留时间和其相对峰面