感停抗流感病毒的实验研究

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1、感停抗流感病毒的实验研究作者：申元英杨占秋王晶潘云华郭利军王涛白丽【关键词】细胞培养【摘要】目的探讨感停抗病毒的疗效。方法采用微量细胞培养法进行抗病毒疗效和病毒滴定。结果感停对流感病毒的最小治疗浓度为:μg/ml，感停对流感病毒的治疗指数为8。经最小有效剂量感停作用后，流感病毒的滴度由TCID0/下降为TCID0/。结论感停在体外对流感病毒有一定的治疗作用。关键词感停流感病毒抗病毒实验细胞培养【Abstract】ObjectivesToevaluatethetherapeuticeffectofGantingagainstinfluenzaMiˉcro-wellce

2、llcultureswasadoptedtoobserveanti-viralactivityandtitertheTheminimalconcenˉtrationofGantingμg/ml，thetiterofinfluenzavirusdeclinedTCID0/TCID0/aftertreatedbyminimalconcentration，andthetherapyGantinghascertaintherapeuticeffectinfightinginfluenzavirusinvitro.KeywordsGantinginfluenzavirusan

3、ti-viralactivitycellculture滇虹药业有限公司根据中药的作用机制研制了一种抗病毒新药―――感停外用喷鼻剂。本研究通过感停的抗流感病毒的实验研究，旨在找到一种有效的早期预防和治疗急性上呼吸道病毒感染的药物，并为该药的开发生产提供理论依据。1实验材料细胞株狗肾细胞系由武汉大学典型细胞保藏中心提供。细胞生长液为10%新生犊牛血清199培养液，内含100U/ml青霉素，100mg/ml链霉素;细胞维持液除含新生犊牛血清含量为2%和2μg/ml胰蛋白酶外，其它成分同细胞生长液。　1.病毒株流感病毒为本室保存。病毒型分别为:A/SH/S/84E。病毒经M

4、DCK细胞活化增殖，细胞病变达75%以上时收获，滴定其滴度为10TICD0/。1.药物供试药感停喷鼻剂、感停滴鼻剂，批号:030501，供试验用为10倍浓缩液及1倍浓度含2%抑菌剂，由昆明滇虹药业公司提供。阳性对照药病毒唑，天津药业集团新郑股份有限公司生产，产品批号:030701。病毒唑注射液含量为100mg/ml，使用浓度为10mg/ml。1.主要试剂199培养基，DIBCOBRL公司生产，批号:1090813。胰蛋白酶，Difico分装，上海金路贸易公司销售。新生犊牛血清，中国云南邓川蝶泉生物血清厂出品，产品批号:XX0607002。青霉素，哈药集团制药总厂生产

5、，产品批号:A03062318。链霉素，华北制药公司生产，产品批号:021111。方法　.1药物毒性测定分别按下列剂量将感停药液加入到生长为良好单层的24孔DMCK细胞培养孔:5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90μl/ml，每一药物剂量设3个重复孔，于37℃，5%CO培养箱中培养4天，每天观察药物对细胞的毒性。.感停的体外抗病毒实验根据病毒的增殖周期，拟定感停对流感病毒的作用方式共分3组:药物杀病毒作用组:分别将药物直接和100TCID0/病毒作用后，再把它们的混合液加到细胞表面，37℃、5%CO孵

6、育2h后，弃上清液，加入细胞维持液培养，观察药物对病毒的直接杀伤作用，连续观察3天。同时设病毒唑、NS和细胞对照。每一剂量分别设3个复孔。药物抗病毒吸附组:采用最大细胞毒剂量的感停进行-2稀释，然后加到细胞表面，37℃、5%CO中孵育2h，弃上清液，分别用100TCID0/流行性感冒病毒攻击细胞，37℃、5%CO中孵育2h，弃上清液，加细胞维持液37℃、5%CO培养，连续观察3天。同时设病毒唑、NS和细胞对照。每一剂量分别设3个复孔。治疗组先分别用100TCID0/流行性感冒病毒吸附细胞，37℃、5%CO中孵育2h，弃上清液，再分别用细胞维持液经-2稀释的最大细胞毒

7、剂量的药物与细胞一起培养，使药物作用于细胞内的流行性感冒病毒以观察药物对病毒的抑制作用，连续观察3天。同时设病毒唑、NS和细胞对照。每一剂量分别设3个复孔。最后，滴定最小有效剂量孔的病毒滴度。　.病毒滴定将各实验组药物作用的细胞培养板反复冻融3次后，合并同一剂量重复孔悬体，分别取按10-1稀释，滴定细胞冻融液中病毒滴度，并重复3孔。结果.1药物对细胞的毒性作用感停对狗肾细胞的最大细胞毒性为20μl/ml。　.药物作用方式感停对流感病毒的最小治疗浓度为:μg/ml;直接杀流感病毒的最小浓度为:13μg/ml;感停不能预防流感病毒的感染。感停对流感病毒的治疗指数［1