孔圣枕中丹对痴呆动物模型抗凋亡作用及机制的研究

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1、孔圣枕中丹对痴呆动物模型抗凋亡作用及机制的研究【摘要】目的：研究孔圣枕中丹抗痴呆动物模型海马神经元细胞凋亡的作用及机制。方法：将50只Wister大鼠随机分为正常组、模型组、脑复康组、孔圣枕中丹低剂量组、高剂量组，每组10只。除正常组外，将其余大鼠制成血管性痴呆大鼠模型。给大鼠灌胃后，采用流式细胞技术检测神经元凋亡率及bcl-2的表达，采用免疫组织化学法观察p53的表达。结果：孔圣枕中丹、脑复康均能降低血管性痴呆大鼠脑海马神经元凋亡率和bcl-2表达，提高p53表达，两组比较无显著性差异。结论：孔圣枕中丹能抑制神经

2、元细胞凋亡，其机制可能与增强p53表达、降低bcl-2表达有关。【关键词】孔圣枕中丹；血管性痴呆；细胞凋亡；bcl-2；p5AbstractObjective：ToobserveantiapoptoticeffectofKongshengZhenzhongpillonhippocampusneuronofratswithvasculardementia.Methods：50Wisterratswererandomlydividedintonormalgroup，modelgroup，Naofukangtreatme

3、ntgroup，KongshengZhenzhongpilltreatmentgroup1，group.Theapoptosisrateofhippocampusneuronandtheexpressionofbcl-weremeasuredbyflowcytometry,theexpressionofp5wasdetectedbyimmunohistochemicalstaining.Results：Comparedwiththemodelgroup，theapoptosisrateofhippocampusne

4、uronandtheexpressionofbcl-weredecreased，theexpressionofp5wasincreasedinNaofukanggroupandKongshengZhenzhongpillgroup，butthereisnosignificantdifferencebetweenNaofukanggroupandKongshengZhenzhongpillgroup.Conclusions：KongshengZhenzhongpillcanalleviateapoptosisrate

5、ofhippocampusneuronthroughupregulatingtheexpressionofp5anddecreasingtheexpressionofbcl-2.KeywordsKongshengZhenzhongpill;apoptosis;bcl-2;p53;vasculardementia血管性痴呆是由缺血性或出血性及急、慢性缺血缺氧性脑血管疾病引起的认知障碍，以记忆减退、表情淡漠、呆滞或人格改变为主要临床表现，其发病与细胞凋亡有关［1~2］。本实验对中药干预后模型大鼠海马神经细胞凋亡与bcl

6、-2、p53蛋白表达的关系进行了研究，现报道如下。1材料与方法实验材料实验动物清洁级纯系Wister雄性大鼠50只，体重g，由山东医科大学动物实验中心提供，合格证号：DXX1021。将动物分笼饲养，自由饮水进食，标准饲料喂养，饲料由山东省实验动物中心提供。药品与试剂孔圣枕中丹的制备：以水为基本溶剂，将龟板、龙骨打碎先煎30min，再加入其他各药煮沸，浓缩制成100％浓度，置于冰箱℃储存备用。西药对照药品为脑复康，由天津金世制药有限公司生产，批号：XX0302，实验前按/kg体重配成混悬液备用。凋亡试剂盒Annexi

7、nV-FITC，PI；Bcl-2试剂盒FluorescEinanti-mouseandratBcl-2，ebioscience，Cat；p53抗体，santacruz，CatNo:sc-6243。实验仪器FACSCaliber流式细胞仪，美国BD公司生产，Imagepro-plus医学图像处理系统，Olympus显微镜。实验方法分组将大鼠随机分为正常组，模型组，脑复康组，孔圣枕中丹高剂量组、低剂量组，每组10只。造模及给药除正常组外其余大鼠参照改良的四血管夹闭法制备大鼠脑缺血再灌注模型，10%水合氯醛mL/kg腹腔

8、麻醉，取仰卧位，颈部正中切口，分离双侧颈总动脉，穿线备用，用微型动脉夹关闭双侧颈总动脉10min，再通10min，反复3次，撤线，缝合［3］。正常组与模型组用生理盐水灌胃，每日1次；脑复康组灌胃西药脑复康10mL/kg，孔圣枕中丹高、低剂量组分别给孔圣枕中丹/kg、g/kg，灌胃给药，每日1次，连续1d。第1d用4%多聚甲醛灌注固定后断头取脑备用。指标观察神