醋酸乙酯萃取绿原酸过程研究.doc

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1、醋酸乙酯萃取绿原酸过程研究作者：杨海燕，孙海峰，汪爱国，陈福明，郭志刚【关键词】萃取;,,绿原酸;,,纯化　　摘要：对金银花粗提粉中萃取高纯度绿原酸的方法进行了研究。萃取分配系数D测定结果表明，醋酸乙酯是纯化绿原酸的适用溶剂。四级萃取的绿原酸回收率将近90%，得到的产品经UV和HPLC检测绿原酸含量分别为69.1%和35.2%。从LC-MS检测结果推断，产品中含有绿原酸异构体和异绿原酸。　　关键词：萃取;绿原酸;纯化　　StudyofExtractingProcessofChlorogenicAcidbyEthylAcetate　　Abstract：Th

2、eextractionmethodofchlorogenicacid(CGA)fromthecrudehoneysucklepowderisstudied.ThedistributioncoefficientDindicated:EthylacetatewasthemostsuitableextractantforCGA'spurification.After4-stageextractions,testdateshowedthatCGA'scontentoftheproductwere35.2%and69.1%byHPLCandUVrespective

3、ly.TheexperimentalCGArecoveryratiowasalmost90%.TheproductwasdeterminedcontainingCGA'sisomerandisochlorogenicacidbyLCMStest.　　Keywords:Extraction;Chlorogenicacid;Purification　　绿原酸（chlorogenicacid）是由咖啡酸（caffeicacid）与奎尼酸（鸡纳酸，quinicacid，即1羟基六氢没食子酸）组成的缩酚酸，异名咖啡鞣酸，化学名3O咖啡酰奎尼酸（3Ocaffeoyl

4、quinicacid），分子量：354.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物，为众多药材（如金银花、茵陈、杜仲）以及中成药（如复肝宁、双花注射液）抗菌解毒、消炎利胆的主要有效成分，同时是某些中药制剂质量控制的重要指标［1］。随着中药现代化进程的加快，制药厂家对金银花等的提取物要求越来越高，特别是欧、美国家制药企业要求中药提取物中的单体成份越纯越好，以便定性定量分析、使用。目前，我国以金银花为原料加工制成的市售产品除复方制剂外，多为浸膏或粗粉［2］，其中绿原酸含量较低，高含量的绿原酸产品上市量很少，且价格昂贵，远远不能满足市场

5、需求。研究新的高含量绿原酸提取分离方法，降低提取分离成本是当务之急。目前从金银花中提取高纯度绿原酸的研究方法主要有溶剂萃取法和大孔树脂吸附法。前者容易实现工业化生产，可选择的溶剂包括醋酸乙酯、正丁醇、异戊醇，后者在进行规模化生产时存在生产周期长的缺点，故而本文以市售金银花粗粉为原料，选择沸点低、价格低的醋酸乙酯为溶剂对绿原酸进行萃取纯化，探讨萃取过程的影响因素，为下一步工业化生产高纯度绿原酸奠定基础。　　1材料与方法4　　1.1材料与仪器采用水提制备的金银花粗提粉，购于安徽宣城百草植物工贸有限公司。绿原酸对照品购自美国Sigma公司。醋酸乙酯等均为分析纯

6、。美国Agilent公司1100型高效液相色谱。美国Agilent公司8453型分光光度计。Agilent1100型高效液相色谱-ESQUIRE2000型离子阱质谱检测仪。质谱扫描条件：离子化源为电喷雾离子化源ESI，检测方式为二级质谱，全范围为50～2200m/z，加热毛细管温度为300℃。　　1.2工艺流程金银花粗提粉→水溶→醇沉→蒸去乙醇→醋酸乙酯萃取→减压浓缩→冷冻干燥金银花粗提粉水溶液的醇沉过程本文作者已进行了详细研究，确定最佳醇沉度为60%，醇沉可有效去除金银花粗粉中的杂质,有关研究另文陈述。醇沉后离心过滤，回收乙醇，剩余液用盐酸调节pH后进

7、行萃取。　　1.3绿原酸含量测定　　1.3.1UV法准确称取绿原酸标品10mg，用50%甲醇定容至100ml，分别用50%甲醇稀释10，5，3.33，2.5，2，1.67倍，以50%甲醇为空白，用1cm比色杯于327nm波长处测吸收度。以吸光度为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，绘制绿原酸标准工作曲线，得到回归方程：Y=18.302X，r=0.9995。绿原酸含量在10.0～60.0μg/ml，范围内，浓度与吸光度间呈良好的线性关系。　　1.3.2HPLC法含量测定色谱条件：参照2005年版《中国药典》附录中绿原酸的高效液相色谱法［3］。色谱柱：ZORBA

8、XC18ODS（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液