银杏叶提取物防治哮喘小鼠气道重塑机制的研究课件

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1、银杏叶提取物防治哮喘小鼠气道重塑机制的研究导师：戚好文教授硕士研究生：李艳1研究背景2研究目的3研究内容4发表文章及致谢研究背景哮喘研究现状哮喘与MMP-9核因子-KappaB(NF-KB)与MMP-9NF-KB与血小板活化因子（PAF）银杏叶提取物与PAF哮喘研究现状Huber(1922)在支气管哮喘患者的尸检中,首次描述了哮喘时气道壁、平滑肌明显增厚，即气道重塑。由于单纯用气道炎症不能完全解释支气管哮喘，因此近年来人们再次把气道重塑作为哮喘研究领域的重点。研究表明，平滑肌增厚可引起气道高反应、增加气道阻力。这无疑增加了哮喘的治疗难度。目前，平滑

2、肌增生机制尚不十分清楚，因此如能了解哮喘时平滑肌增生机制，则对临床治疗哮喘大有益处。MMP-9MMP-9属于基质金属蛋白酶（MMPs）家族，MMPs是一类依赖金属离子锌、钙，并以细胞外基质和基底膜为水解底物的蛋白酶大家族。MMP-9为明胶酶，其作用底物为Ⅳ、V、Ⅶ、X型胶原、明胶、变性胶原、弹性蛋白等。MMP-9在肺内的表达正常肺结构细胞各种刺激下，支气管上皮细胞，肺泡Ⅱ型细胞，纤维原细胞，平滑肌细胞，内皮细胞肺内巨噬细胞，嗜酸性粒细胞，淋巴细胞，NK细胞，树突状细胞肺癌细胞，不管原发还是继发MMP-9（-）MMP-9（+）MMP-9（+）MMP-

3、9（+）MMP-9和气道重塑MMP-9GFs前体GF活化上皮下成纤维细胞活化胶原沉积基底膜增厚气道重塑哮喘MMP-9与哮喘哮喘持续状态急性重度哮喘中度哮喘未治疗稳定期及轻度哮喘MMP-9持续增加MMP-9大量增加MMP-9有所增加MMP-9未见增加NF-KB和MMP-9NF-KB是一种重要的核转录因子，几乎存在于所有细胞，调节150多种基因的表达，涉及细胞活动的许多领域如：炎症反应、免疫应答、细胞增殖分化、细胞凋亡等研究证明，MMP-9是NF-κB的靶基因。NF-κB是MMPs的上游调节因子，大量研究证实，细胞外基质金属蛋白酶上存在NF-κB的识别

4、位点PAF和NF-KB研究证明PAF是NF-κB的有效激活因子，而且PAF主要在NF-κB激活的早期阶段发挥作用HeonSeoK等人也发现在黑色素瘤细胞中PAF也是通过NF-KB通路来增加抗凋亡因子的表达银杏叶提取物Egb和PAF银杏叶是我国名贵中药银杏的叶，其提取物的有效药用成分主要为总黄酮和银杏内酯，具有多种药理作用Egb的药理作用有很多方面：清除自由基和抗脂质过氧化；改善心脑缺血和外周血液循环；改善血液流变性作用等银杏内酯B是研究得最广泛的天然PAF受体拮抗剂Egb在哮喘防治方面的研究有很多，但涉及气道重塑防治的研究未见报道研究目的PAFNF

5、-KBMMP-9（+）？研究内容1银杏叶提取物对慢性哮喘小鼠表达MMP-9的影响2慢性哮喘小鼠气道重塑机制的探究和Egb的干预作用实验第一部分清洁级BALB/c小鼠鸡卵清蛋白银杏叶提取物RT-PCR试剂盒即用型SABC免疫组化试剂盒材料方法一：建立慢性小鼠哮喘重塑模型40只小鼠按随机数字法正常组哮喘组银杏叶干预组地塞米松干预组激发前1h予生理盐水第0，7，14天致敏，15天起激发6周激发前1h予生理盐水激发前1h予银杏叶提取物注射液激发前1h予地塞米松注射液统计学处理病理组织学观察，HE染色三免疫组化法测MMP-9蛋白表达五半定量RT-PCR测MM

6、P-9mRNA表达四取材二七定量及计算机图像分析六结果气道重塑模型结果对照组行动敏捷，一般情况未见异常。哮喘组经激发后，出现呼吸急促，口唇紫绀，腹部翕动，易激惹，烦躁不安。地塞米松干预组、银杏叶干预组也出现哮喘组情况，但症状明显减轻。HE染色A.对照组小鼠气道无明显增厚、内壁光滑，气道周围无炎性细胞浸润，肺泡壁结构完整B.哮喘组小鼠气道平滑肌层明显增厚，管壁周围大量炎性细胞浸润，肺泡有明显出血C.地塞米松干预组小鼠气道增厚明显减轻，管壁周围少量炎性细胞浸润D.银杏叶干预组气道壁增厚也见减轻，炎性细胞减少ABCD图各组小鼠肺组织石蜡切片HE染色图（×

7、400）小鼠肺组织MMP-9mRNA表达左图为4组小鼠肺组织MMP-9RT-PCR电泳图。泳道1、2、3、4依次为对照组、哮喘组、银杏叶干预组、地塞米松干预组，M为marker。在300bp附近的条带为管家基因GAPDH，在400-500bp之间的条带为MMP-9mRNA。M1234图各组小鼠肺组织MMP-9RT-PCR电泳图300bp-400bp-500bp-各组小鼠肺组织MMP-9RT-PCR吸光度比值哮喘组MMP-9mRNA表达量高于正常对照组(P<0.01)地塞米松干预组表达量明显低于哮喘组(P<0.05)，但仍高于正常组(P<0.01)银

8、杏叶干预组介于哮喘组与地塞米松干预组之间小鼠肺组织MMP-9蛋白表达ABCD图各组小鼠肺组织MMP-9蛋白的表达（×400