《临床免疫学》本科课件22免疫学检测技术

《《临床免疫学》本科课件22免疫学检测技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、免疫学检测技术特异性比例性可逆性阶段性抗原抗体反应的特点电解质生理盐水或缓冲液，Ca2+，Mg2+酸碱度pH6～8，补体pH7.3～7.4温度15℃～40℃，37℃最适冷凝集素4℃最适抗原抗体反应的影响因素检测抗原和抗体的体外实验颗粒性抗原或吸附于载体颗粒上的可溶性抗原（或抗体）与相应抗体（或抗原）结合，在电解质参与下，出现肉眼可见的凝集现象。一、凝集反应颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的参与下，出现肉眼可见的凝集现象。常用颗粒性抗原：红细胞、细菌等玻片法和试管法1.直接凝集反应玻片凝集试验结果判断阳性阴性试管凝

2、集试验将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，与相应的抗体或抗原结合，在电解质的参与下，出现肉眼可见的凝集现象。2.间接凝集反应用已知抗原致敏载体---检测未知抗体正向间接凝集试验用已知抗体致敏载体---检测未知抗原反向间接凝集试验二、沉淀反应沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合，在一定条件下出现肉眼可见的沉淀现象。沉淀反应的类型液相内沉淀反应环状沉淀试验絮状沉淀试验免疫浊度测定凝胶内沉淀反应单向扩散试验双向扩散试验免疫电泳技术（一）免疫浊度测定的原理可溶性抗原与相应抗体在特殊缓冲液中能快速形成一定大小的抗原抗体复合

3、物，使反应液体变浑浊，呈现一定的浊度。当抗体量恒定且过量时，浊度与抗原的量成正比。利用光学测量仪器对浊度进行测定，从标准曲线查出抗原含量。透射比浊法和散射比浊法光路检测器A检测器BICI0IθIθ透射比浊法散射比浊法可溶性抗原与相应抗体在含有电解质的凝胶中向四周扩散，形成浓度梯度，两者相遇并在比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀物。（二）凝胶内沉淀试验原理：将一定量的抗体混入琼脂凝胶中，使待测抗原在凝胶中自由扩散，与抗体结合形成沉淀环，沉淀环大小与抗原浓度呈正相关。1.单向琼脂扩散试验（沉淀环直径)2抗原浓度1.抗体混

4、于凝胶中2.抗原加入孔内3.抗原自由扩散标准品抗原浓度测定不同病人抗原浓度测定1.测定沉淀环直径2.在标准曲线上查找相应抗原浓度原理：将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成沉淀线。2.双向琼脂扩散试验原理示意图AbAg模拟图染色标本图1.抗原抗体双向自由扩散2.24小时出结果3.呈现沉淀线或弧1.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。2.以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为该抗体的效价。抗体效价测定“1”为单一抗原抗体系统。“n”为多个抗原抗体系统。*

5、可以用混合抗原鉴定抗体纯度。抗原抗体纯度鉴定*可以用混合抗体鉴定抗原纯度。免疫技术以抗原-抗体反应原理为基础，对样品中相应抗原或抗体进行检测。——高特异性标记技术将可被探测的示踪物质（酶、荧光素、放射性核素、胶体金、化学发光物质等）用化学方法与化合物连接。——高敏感性三、免疫标记技术－基本概念常用免疫标记技术放射免疫技术荧光免疫技术酶免疫技术胶体金免疫技术化学发光免疫技术生物素-亲和素免疫技术基本原理：酶免疫技术是利用酶标记抗体(抗原)与相应抗原(抗体)反应形成抗原-抗体-酶复合物，酶催化相应的底物显色，根据颜色变

6、化和显色深浅进行定性和定量。（一）酶免疫技术辣根过氧化物酶（HRP）ELISA中应用最为广泛的标记酶HRP常用底物四甲基联苯胺TMB无色——蓝色——黄色微量反应板E固相抗体标本（含抗原）酶标抗体EE底物双抗体夹心法检测抗原固相抗原标本（含抗体）酶标二抗底物EEE间接法检测抗体（二）荧光免疫技术荧光物质：荧光物质是一类经激发能发射荧光的物质。荧光色素：能产生明显荧光并可用作染料的有机化合物常用荧光色素荧光色素：FITC、RB200、PE等FITCRB2001、直接法荧光素标记抗体FF抗原荧光抗体技术类型2、间接法FF

7、荧光素标记抗体抗原抗体阳性细胞显色有胞质型、胞核型、膜表面型，显色深浅可作为抗原定性、定位和定量依据。“-”为无或仅见极微弱荧光；“+”为荧光较弱但清楚可见；“2+”为荧光明亮；“3+”为耀眼的强荧光。“2+”以上判定为阳性，对照光应呈“-”或“±”。结果判定①自身抗体检测抗核抗体(均质型)抗核抗体(核膜型)抗核抗体(斑点型)荧光抗体技术的应用（三）放射免疫技术电化学发光免疫分析（ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应。（四）

8、电化学发光免疫技术电化学发光免疫测定示意图46（五）胶体金免疫技术金免疫技术（免疫金标记技术、免疫胶体金技术）是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体检测的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金原子颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金结合物固相NC