项目名称基于毛细管电泳技术筛查中药扩血管活性成分的研

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1、项目名称：基于毛细管电泳技术筛查中药扩血管活性成分的研究和应用推荐单位（专家）：陕西省教育厅项目简介：项目立项背景：近年来，人们广泛应用生物模型及药物作用靶标进行药物筛选的研究工作，已经建立的药物筛选模型主要有整体动物模型、受体模型、细胞模型、基因芯片技术和色谱技术等。这些方法各具优势，也存在各自的不足，其共同缺陷是样品须经过纯化处理、筛选周期长等。虽然亲和色谱等方法也可获得药物-靶标之间的结合常数，但存在受体固定相制备成本较大的缺陷，而毛细管电泳（CE）微量操作的特征恰好解决了这一问题；且不需要进行样品纯化、分析速度快、可在生理环

2、境或接近生理环境下运行，可获得较为真实的生物分子间相互作用信息。有望发展成为一种非常有潜力、高效、准确的药物筛选新手段。然而，CE在药物与生物分子相互作用研究中还面临一些问题：从研究对象上讲，对生物酶及运输蛋白（血清白蛋白）的研究较为广泛，但对药物在人体内的主要作用靶点即受体的研究还有待深入；从CE本身来讲，研究药物-受体相互作用时存在受体经非定向固定化反应键合到毛细管内壁后可能丧失活性等不足之处。为了克服受体等功能蛋白非定向固定化产生的弊端，其定向固定化已成为发展方向，研究结果表明，生物大分子的定向固定化可以显著提高其稳定性和生物

3、活性。但是，该方法尚未应用到毛细管电泳药物筛选研究中。科学价值：本项目通过β2-AR分子胞外结构域N-末端含有的2个糖基（此区域与配体结合的特异性无关且远离跨膜区），将其定向键合在毛细管内壁，建立了受体在毛细管内壁的定向键合新方法；并建立了定向固定化受体键合量的定量测定新方法；表征了定向和非定向固定化受体的生物活性；以与受体有特异性及非特异性作用的药物为例，阐明了受体定向键合在药物筛选中的先进性、选择性、重复性和可靠性；建立了归一化容量因子、结合常数等多参数方法评价受体对药物选择性作用；以具有明确抗心血管疾病功效但药效物质尚待深入研

4、究的赤芍为例，对其扩血管活性成分进行筛选，得出了各提取物与β2-AR作用活性强弱顺序，发现B18-19-②与β2-AR之间存在较强作用力，并结合在线质谱联用技术进行结构鉴定。建立以G-蛋白偶联受体毛细管电泳为核心的扩血管活性成分筛选新方法，可为药物活性成分的毛细管电泳高通量筛选研究提供思路，对于合理解释药物的作用机理及开发新型抗心血管疾病药物具有重要意义；可加快抗心血管疾病药物的研发步伐，降低心血管疾病死亡病例。同行引用及评价情况：在此基础上，发表相关论文40余篇，其中SCI检索13篇，EI3篇，专著1部；培养青年教师3人，1人博士

5、在读，培养本科生50余名；所发论文被AnalyticalChemistry、Talanta、JournalofChromatographyA等权威期刊引用，其中浙江大学WangYi教授在molecule期刊指出该项目所建方法是从天然产物中筛选活性组分的一种非常有潜力的方法；意大利Sassart大学Zinellu教授在权威期刊JournalofChromatographyA中指出本项目所建方法为研究相互作用的有效方法，其他论文也被多次引用，证明了该项目研究成果的先进性。5主要完成人情况表：姓名刘春叶技术职称教授排名第一工作单位西安医学

6、院完成单位西安医学院曾获科技奖励情况2015年3月作为第一完成人获得陕西省教育厅颁发的陕西高等学校科学技术奖二等奖（项目名称：心血管类药物的提取分离、活性评价及筛选研究）。本人对本项目主要学术贡献：（限300字）建立了毛细管内壁β2-AR键合量的定量分析方法；采用亲和毛细管电色谱法，以归一化容量因子、结合常数、结合位点数等为参数，对药物及赤芍提取物与受体的相互作用进行测定，从而对活性进行评价。姓名张剑技术职称讲师排名第二工作单位西安医学院完成单位西安医学院曾获科技奖励情况2015年3月作为第二完成人获得陕西省教育厅颁发的陕西高等学校

7、科学技术奖二等奖（项目名称：心血管类药物的提取分离、活性评价及筛选研究）。本人对本项目主要学术贡献：（限300字）承担受体非定向键合条件的优化，包括反应物浓度、反应温度、微波功率、微波时间等对受体键合量的影响；根据靶点β2-AR受体已知阳性药物为参考，尝试合成系列待筛选化合物。姓名苗延青技术职称副教授排名第三工作单位西安医学院完成单位西安医学院曾获科技奖励情况2015年3月作为第三完成人获得陕西省教育厅颁发的陕西高等学校科学技术奖二等奖（项目名称：心血管类药物的提取分离、活性评价及筛选研究）。本人对本项目主要学术贡献：（限300字）

8、承担受体定向键合条件的优化，包括反应物浓度、反应温度、微波功率、微波时间等对受体键合量的影响；根据靶点β2-AR受体已知阳性药物为参考，尝试合成系列待筛选化合物；承担了键合毛细管的红外表征、扫描电镜等定性表征，并对所得结果进行分析。5