植物离体无性繁殖和脱病毒技术ppt课件

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1、第四章植物离体无性繁殖和脱病毒技术第二节植物脱病毒技术要点概述理解：脱毒苗的意义；了解：1、病毒在植物体内的分布及危害。2、植物脱毒苗的鉴定、保存、应用与繁殖。掌握：1、无病毒苗概念；2、植物脱毒的原理和方法。。无病毒苗是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。潜隐性病毒侵染植物造成症状不明显的慢性危害，不易被发现，尤其危险。国内外解决作物病虫害的有效途径是培育无病毒苗，实施农作物无病毒化栽培。一.病毒在植物体内的分布、传播及危害1.分布在植物体内的

2、分布具有不均匀性，随植株不同部位和年龄而异。老叶和成熟组织及器官中病毒含量较高根尖、茎尖生长点约0.1~1mm区域内，几乎不含病毒。(原因：分生组织细胞分裂和生长速度快，而病毒在植物体细胞内繁殖速度相对较慢；另外，病毒是通过筛管组织或胞间联丝传播至其他组织细胞的，而茎尖分生组织无分化，没有维管组织。)2）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性高，竞争抑制了病毒的复制；3）在植物体内，可能存在着病毒钝化系统，它在分生组织中比其他任何区域具有更高的活性。4）在茎尖存在高水平内源生长素，也可能抑制病毒的增殖。（二）植物脱病毒方法物理方法化学方法生物方法高温处理茎

3、尖培养微体嫁接珠心培养愈伤脱毒热处理脱毒1.热处理脱毒法热处理脱毒原理:病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞DNA一起复制。热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，失去传染能力。作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。热处理的方法：（1）温汤浸渍处理（2）热空气处理脱毒法试验母株在高温生长室中生长一段时间，其顶端分生组织比次生分生组织生长迅速，后切取其茎尖分生组织进行离体培养。生长室温度35-40℃光照3000—10000lx热处理的优缺点优点:方法简单，效果明显。缺点:1)具有局

4、限性，不能去除所有病毒。只对圆形病毒（苹果花叶病毒），或对线状病毒（马铃薯卷叶病毒）有效；而对杆状病毒（千日红病毒）无效。2)热处理后只有小部分植株能够存活。极易使植物材料受热枯死，造成损失3）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。生物学方法包括茎尖分生组织培养、微型嫁接、愈伤组织诱导、珠心组织培养。1、茎尖分生组织培养1）原理及依据病毒在植物体内分布不均，茎尖处含量最少病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争2）操作程序外植体经表面消毒灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，放入培养

5、室内进行培养，并及时观察和记录培养结果。茎尖培养1）茎尖大小：一般以带1-2片叶原基为好，大小为0.2-0.3毫米为宜，超过0.5毫米时，脱毒效果差。（外植体过小茎尖存活率低）2）培养基：能使茎尖快速生长、分化的培养基均适于脱毒。3）前处理：切取茎尖之前，植物材料如经过预处理，如热水或热空气处理、低温处理、药物处理，均可大大提高脱毒效率。4）培养条件：同一般茎尖培养5）外植体生理状态：由活跃生长的芽上切取优缺点：茎尖越小，去病毒机会越大，脱毒效果就越好，但同时因为其含营养及水量太低，故培养时对培养基的要求就越高，对剥离技术要求也越高。2、微型嫁接应用

6、微型嫁接的原因：木本植物茎尖培养难以生根形成植株。具体做法：将极小的茎尖（0.14mm~1.0mm）作为接穗嫁接到不带病毒的种子实生苗砧木上，然后将砧木、接穗一起在培养基上培养。优点：接穗在砧木上易成活，故可用很小的茎尖来培养，去除病毒几率大，获得无病毒苗的可能性大。微嫁接要求的剥离技术高，嫁接成活率与接穗大小呈正相关，而脱毒率与接穗大小呈负相关脱除病毒的关键：①要求剥离技术很高②需要考虑砧木和接穗对营养组成的不同要求；③与接穗的取材季节有密切关系（苹果4~6月取材嫁接成活率较高。）3、愈伤组织培养脱毒法（1）原理及依据a、病毒在植物体内分布不均匀b

7、、病毒复制的能力衰退或丢失c、继代培养的愈伤组织产生抗性变异（2）技术关键诱导再生植株的愈伤组织（3）操作程序植物各种器官或组织诱导产生出愈伤组织，愈伤组织多次继代，然后从愈伤组织再诱导分化芽，长成植株。愈伤组织培养脱毒法脱毒效果不定，常出现一些变异。4、珠心组织病毒是通过维管组织传播，而珠心组织和维管束系统无直接联系，故可以通过珠心组织离体培养获得无病毒植株。目前已用该方法去除了柑橘银屑病、叶脉突出病、柑橘裂皮病、速衰病等病毒。缺点：会有20%~30%左右的变异率，同时无毒苗苗期较长。柑橘要6~8年才能结果。三、植物病毒的检测及无病毒苗的保存和繁殖

8、植物病毒引起症状是各异的，在观赏植物上由病毒引起外部症状主要有以下几种：（1）变色：褪绿、黄化、花叶、斑驳、