温度、ph、激活剂、抑制剂对酶活性的影响

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1、温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响（间接碘量法）（effectsoftemperaturepHactivitorandinhibitortoactivityofenzyme）一、目的1.了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响2.学习酶活性的判定二、原理酶活性大小可以用反应速度来表示，即在单位时间内，酶所催化底物的消耗量或产物的生成量来衡量。酶活性大，反应速度就快。反之则慢。酶促反应速度受多种因素的影响。如温度、pH、激活剂、抑制剂等。本实验是观察在不同温度，pH，以及缺乏激活剂或有抑制剂的条件下唾液淀粉酶的活性大小。借以验证各种因素对酶活性

2、的影响。唾液中含有唾液淀粉酶，此酶可以使淀粉逐步水解，最后生成麦芽糖。麦芽糖具有还原性。根据淀粉被唾液淀粉酶水解后产物的生成量（即还原性麦芽糖的多少）判定酶活性的大小。用碘的反滴定法测定还原物的量，还原物多，酶活性大。具体反应如下：1、试剂成分（S、H、S试剂）：CuSO4、Na2CO3、NaHCO3、KI、KIO3、酒石酸钾钠、草酸钾。2、判定酶活性大小的化学反应过程：Na2CO3＋2H2O—→2NaOH＋H2CO3CuSO4＋2NaOH—→Cu(OH)2↓＋Na2SO45KI＋KIO3＋3H2SO4—→3I2＋3K2SO4＋3H2O酶淀粉———→麦

3、芽糖麦芽糖＋Cu++—→麦芽糖氧化产物＋Cu+Cu+＋I2—→Cu++＋2I-COO-草酸钾COO-Cu++＋

4、—————→

5、>CuCOO-防止逆反应COO-剩余I2＋Na2S2O3—→2I-＋Na2S4O6（与淀粉呈兰色)（与淀粉无色)3、判定酶活性大小的标志酶活性大→麦芽糖多→Cu+生成量多→I2消耗量多→剩余I2少→Na2S2O3消耗量少酶活性越大，Na2S2O3消耗量越少。空白实验无酶活性，因此Na2S2O3消耗量最多。与空白实验进行对比，差值越大，说明此条件下酶活性越大。3三、实验用品：（一）器材1.中试管16支。2.试管架1个。3.恒温水浴

6、箱1台。4.温度计1支。5.50ml量筒1个。6.吸管：0.5ml1支，1ml2支，2ml1支，5ml1支，10ml1支。7.25ml、100ml烧杯各1个。8.电炉子一个。（二）试剂1.2%淀粉溶液2.1NNaCl溶液：称取58.5gNaCl，溶于1000ml水中。3.磷酸盐缓冲液甲液：称取Na2HPO4·12H2O23.9g溶于1000ml水中，既为M/15Na2HPO4溶液，此溶液pH为8.5。乙液：称取KH2PO49.08g溶于1000ml水中，既为M/15KH2PO4溶液，此溶液pH为4.5。取甲液37.5ml，乙液62.5ml，两液混匀后既

7、为pH6.6磷酸盐缓冲液。4.0.01%HgCl2。5.1NH2SO4溶液：取水约250ml，加入浓H2SO428ml，稀释至1000ml。6.Shaffer-Hartman-Somogyi试剂（S、H、S试剂）溶液A：结晶硫酸铜（CuSO4.5H2O）6.5g溶于100ml水中。溶液B：酒石酸钾钠12g，无水碳酸钠20g，碳酸氢钠25g溶于500ml水中。溶液C：碘化钾10g，碘酸钾0.8g，草酸钾18g溶于300ml水中。将溶液B倒入溶液A中混匀，再倒入溶液C混匀后定容至1000ml。7.标准0.005NNa2S2O3溶液：取硫代硫酸钠（Na2S2

8、O3.5H2O）25g溶于1000ml水中。此溶液浓度约为0.1N，其准确浓度须用碘酸钾标准方法标定。（方法略）取已调整至0.1N标准Na2S2O3溶液50ml稀释至1000ml即为0.005N。四、实验步骤：1、制备稀释唾液：收集唾液于小烧杯内，吸取下层唾液0.5ml（要求无气泡）加入量筒内，用蒸馏水稀释至25ml，混匀备用。2、取中试管8支，标号0—7，0号为空白对照，1-3号为测定温度对酶活性的影响，4-5号为pH对酶活性的影响，6-7号为激活剂和抑制剂对酶活性的影响按下表操作。加入试剂及唾液后各管充分混匀。3影响因素管号淀粉NaCl缓冲溶液H2

9、O温度稀释温度（ml）（ml）pHmlml时间唾液时间空白04.02.06.62.03.037℃10ˊ--37℃20ˊ温度的14.02.06.62.02.537℃10ˊ0.537℃20ˊ影响24.02.06.62.02.510℃10ˊ0.510℃20ˊ34.02.06.62.02.580℃10ˊ0.580℃20ˊpH值的44.02.04.52.02.537℃10ˊ0.537℃20ˊ影响54.02.08.52.02.537℃10ˊ0.537℃20ˊ激活剂64.0—6.62.04.537℃10ˊ0.537℃20ˊ抑制剂74.0HgCL26.62.02.53

10、7℃10ˊ0.537℃20ˊ的影响（2ml）3、充分混匀后开始保温，保温后立即由各管吸取2ml