微生物的纯种分离培养及接种技术

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1、微生物的纯种分离培养及接种技术实验四一．实验目的通过学习学习微生物的纯种分离，培养和接种技术，进而学会微生物生理生化反应的实验，为废水处理服务。在水处理的细菌检查中，细菌的分离，培养和接种也是一个重要的环节。微生物的纯种分离的方法有两种：稀释平板法和平板划线法。二.实验器材1.无菌培养皿（直径90mm），无菌吸管，无菌锥形瓶，无菌试管，5管无菌水（每管有9ml灭菌过的自来水）。2.营养琼脂培养基（已灭菌的），活性污泥。3,接种环，酒精灯，恒温箱，等。三.实验内容（一）培养基的制备及灭菌1.玻璃器皿的包扎与灭菌（1）六套培养皿一组,用报纸包装。（2）取四支吸量管，在其吸端塞

2、少许棉花后用长报纸条包扎。（3）干热灭菌:上述玻璃器皿在160°C烘箱内2小时。2.无菌水的制备在3支试管中各装入9ml自来水，塞上硅胶塞,同下述培养基一起用高压蒸汽灭菌。3.培养基的制备⑴称量：牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂自来水0.75g1.5g0.75g3g150ml⑵溶化：用烧杯在电炉上将上述各物依次溶解，注意补充水。⑶调pH值：溶液稍冷后用pH试纸、10%NaOH或10%HCl调整溶液的pH在7.6左右。⑷分装：试管4支各装其高度1/5的溶液，其余溶液装锥形瓶。⑸加塞包扎：锥形瓶加棉塞并用牛皮纸包扎。⑹湿热灭菌：（高压蒸汽灭菌）1.05kg/cm2(103kPa)、12

3、1℃灭菌20min。⑺搁置斜面：试管培养基冷至50℃时斜搁使斜面长度不`超过试管一半。（二）微生物的分离、培养及形态观察1.平板划线分离法(1)倒平板:将融化并冷至50℃的细菌培养基倒约15~20ml于无菌培养皿中，立即放在桌上轻轻转动使之均匀。冷后成平板。（3个）(2)划线：在火焰旁，左手拿平板，右手拿接种环，取一环菌液（原污水）在平板上划线。常用的方法有如下三种：划线完毕后盖上皿盖，倒置于37℃恒温箱中培养48小时后观察结果。2.稀释平板分离法(1)取样…(2)稀释水样以无菌操作按十倍稀释法用无菌吸量管和无菌水将10-3倍的水样稀释至10-4、10-5、10-6倍。(3

4、)平板制作将三套无菌培养皿编号，将上述三种浓度的水样各吸0.5ml于相应的培养皿中。加热融化培养基，待其冷至约45℃时以无菌操作倾注10~15ml入培养皿中，马上将培养皿平放桌上轻轻转动使之混合均匀，冷却后成平板。倒置，于37℃培养48小时后观察结果。10-110-210-310-410-510-6（二）其他一些接种的操作技术1．斜面接种技术2．液体接种3．由液体培养基接种到液体培养基4．穿刺接种三．操作方法及步骤1)实验名称，学生姓名，学号，班号和实验日期2)实验目的和要求3)实验仪器，设备和材料4)实验原理5)实验步骤6)实验原始记录7)实验数据计算结果8)实验结果分析

5、，讨论实验指导书中提出的思考题，写心得体会四、实验报告要求五.思考题1分离活性污泥为什么要稀释水样？你考虑怎样来进行生物膜法生物膜的纯种分离和培养？2用一根无菌吸管取几种浓度的水样时，应从哪一个浓度开始？为什么？