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1、广西不同产地华南忍冬中绿原酸含量测定【关键词】华南忍冬；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定Abstract：ObjectiveTodeterminethecontentofchlorogenicacidinFructusLoniceraConfusaDC(FLCD)fromdifferentplacesinGuangxibyHPLC,andevaluateitsinternalquality.MethodsHPLCseparationedonaAgilentC18analyticalcolumn(4.6mm×150mm,5μm)bygradientelutingethanol-0.05%pho
2、sphoricacidatthefloL/min.Thecolumntemperature.ResultsThechlorogenicacidcontentofFLCDfromdifferentplacesinGuangxirangedfrom2.21%to3.94%.ConclusionThechlorogenicacidcontentsofFLCDfromdifferentplacesinGuangxiaredifferent,butallofthemareuptothestandardofPhamarcopoeiaofthePeople’sRepublicofChina.Keyinat
3、ion华南忍冬为山银花的一种,系忍冬科忍冬属植物华南忍冬LoniceraconfusaDC.的干燥花蕾,具有清热解毒之功效,同时还是重要的化工原料和优良饮品原料。2000年版及其之前的《中华人民共和国药典》将华南忍冬当作山银花使用,2005年版《中华人民共和国药典》将华南忍冬定为山银花3种植物之一[1]。 1仪器与试药安捷伦Agilent1100高效液相色谱仪；CG-16illiporeSimplicity-185超纯水仪(美国密里博公司)；BP211D电子分析天平(德国赛多利斯)；Agilent8453紫外分析仪(美国安捷伦科技公司)。绿原酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号11
4、0753-200413)；实验用10批样品均经广西中医药研究所副研究员方鼎鉴定为忍冬科植物华南忍冬LoniceraconfusaDC.的干燥花蕾或带初开的花。甲醇、乙腈(天津四友生物医学技术有限公司,色谱纯)、乙醇(北京化工厂,分析纯)、磷酸[中国医药(集团)上海化学试剂公司,分析纯],其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1对照品溶液的制备取绿原酸对照品3mg,精密称量,置10mL容量瓶中,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀,得到浓度为0.3mg/mL的溶液,备用。 2.2供试品溶液的制备精密称定华南忍冬药材粉末0.1g,精密加入70%乙醇50mL,超声提取30min,所得溶液趁热离心1
5、5min,取上清液即可。 2.3色谱条件色谱柱为AgilentC18柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相为乙腈-甲醇-0.05%磷酸,0～20min三相的比例为7∶5∶88,25min为13∶13∶74,体积流量为0.5mL/min；柱温为30℃；检测波长327nm；进样10μL；理论塔板数以绿原酸计不低于1000。 2.5精密度试验精密量取上述同一供试品溶液10μL,重复进样6次,按上述色谱条件测定,绿原酸峰面积积分值的RSD＝0.50%。 2.6重复性试验分别取同一批样品各6份,按“2.2”项下方法制备并进行测定,结果绿原酸的平均含量为3.30%,RSD＝1.05%。 2
6、.7稳定性试验取同一供试品溶液,按上述色谱条件,分别在0、2、4、8、16、24h不同的时间点进行检测,考察样品溶液的稳定性。结果表明,绿原酸的RSD＝1.06%,说明供试品溶液在24h内稳定。 2.8加样回收率试验 取已知含量的样品0.05g,精密称定,分别精密加入绿原酸对照品溶液(1.096mg/mL)1mL,按照“2.2”项下方法制备,依次测定,计算回收率。结果见表1。表1加样回收率测定结果（略） 2.9样品测定 取10批广西不同产地的样品,按上述测定方法进行测定,以外标峰面积法计算样品的含量。结果见图1、表2。表2广西不同产地华南忍冬样品中绿原酸含量测定结果（略） 3讨论
7、 2005年版《中华人民共和国药典》中,山银花的含量测定使用乙腈-0.4%磷酸溶液(8∶92)作为流动相；而在试验过程中,反复使用此条件都不能使样品有很好的分离结果,后采用甲醇-乙腈-0.05%磷酸溶液三相作为流动相,采用梯度洗脱的方法,使样品中绿原酸峰以及其它峰得到很好的分离。广西华南忍冬的产地主要分布在广西的上思县、横县、邕宁县等地,多为野生零散分布,但其主要有效成分绿原酸含量均已达到《中华人民共和国药典
